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.2013:8:1825-34.
doi:10.2147/IJN。S44342。 Epub 2013年5月8日。

疏水修饰普鲁兰纳米粒的细胞摄取机制和细胞内命运

姜丽琴（Liqin Jiang） 1, 李雪敏, 刘玲蓉, 张启庆（Qiqing Zhang）
附属公司

疏水修饰普鲁兰纳米粒的细胞摄取机制和细胞内命运

姜丽琴（Liqin Jiang）等。 国际纳米医学杂志. 2013.

摘要

研究了胆固醇修饰普鲁兰多糖（CHSP）自组装纳米粒（NPs）在人肝癌（HepG2）细胞中的细胞摄取机制和细胞内命运。与异硫氰酸荧光素（FITC）共价偶联产生稳定标记的CHSP（FITC-CHSP），通过透析成功配制成NP（平均粒径63.0±1.9nm）。细胞毒性试验清楚地表明，CHSP NP在HepG2细胞中没有显示出显著的毒性。用荧光法系统评价了NP浓度、孵育时间和温度对NP细胞摄取的影响，结果表明NP的细胞摄取与浓度、时间和温度有关。用内吞抑制剂进行的体外实验表明，氯菊酯介导的内吞作用和大胞饮作用参与CHSP-NP的内化。细胞内转运研究表明，CHSP-NP在孵育后1小时被包裹在溶酶体中；在整个研究过程中，未观察到NP与高尔基体或内质网共定位。这些结果表明，CHSP NP可以作为治疗剂细胞内递送的多功能载体。

关键词：FITC；胆固醇修饰普鲁兰多糖；内吞作用；细胞内贩运；自组装纳米粒子。

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数字

图1
图1
的FT-IR光谱(A类)FITC公司(B类)CHSP和(C类)FITC-CHSP公司。缩写：胆固醇修饰普鲁兰多糖；异硫氰酸荧光素；傅里叶变换红外光谱。
图2
图2
(A类)形态特征和(B类)FITC-CHSP NP的尺寸分布，分别由TEM和DLS测定。缩写：动态光散射；异硫氰酸荧光素标记的胆固醇修饰普鲁兰多糖；NP，纳米粒子；透射电子显微镜。
图3
图3
37°C时，FITC-CHSP NPs中FITC在PBS（pH 7.4）中的体外释放曲线。注：数据表示平均值±SD（n=3）。缩写：胆固醇修饰普鲁兰多糖；异硫氰酸荧光素；NP，纳米粒子；PBS，磷酸盐缓冲盐水；SD，标准偏差。
图4
图4
CHSP NPs对hepg2细胞的细胞毒性。注：数据表示平均值±SD（n=6）。缩写：胆固醇修饰普鲁兰多糖；HepG2，肝细胞癌；NP，纳米粒子；SD，标准偏差。
图5
图5
CHSP NPs的细胞摄取曲线与(A类)NP浓度（4小时，37°C）和(B类)培养时间（0.15 mg/mL，37°C）。注意事项：HepG2细胞与FITC-CHSP NPs在上图所示的条件下孵育，并制备样品用于CLSM研究（比例尺，20μm）。缩写：胆固醇修饰普鲁兰多糖；共焦激光扫描显微镜；异硫氰酸荧光素；HepG2，肝细胞癌；NP，纳米颗粒。
图6
图6
37°C时NP浓度对hepg2细胞摄取细胞的影响。注意事项：将0.05至2 mg/mL的各种NP浓度应用于HepG2培养物4小时。数据表示平均值±SD（n=4）。缩写：HepG2，肝细胞癌；NP，纳米粒子；SD，标准偏差。
图7
图7
37°C下培养时间对hepg2细胞摄取NP的影响。注意事项：使用的NPs浓度为0.15 mg/mL。数据表示平均值±SD（n=4）。缩写：HepG2，肝细胞癌；NP，纳米粒子；SD，标准偏差。
图8
图8
温度对hepg2细胞摄取纳米颗粒的影响。(A类)共聚焦图像显示CHSP NPs的细胞摄取；(B类)通过荧光测定法量化CHSP NPs的细胞摄取。注意事项：使用两种不同的温度4°C和37°C来评估三种不同浓度NPs（0.3、0.6和0.9 mg/mL）的摄取。对于(A类)，标尺=20μm；中的数据(B类)代表平均值±标准差（n=4）。缩写：胆固醇修饰普鲁兰多糖；HepG2，肝细胞癌；NP，纳米粒子；SD，标准偏差。
图9
图9
内吞抑制剂对FITC-CHSP NPs内化的影响。注意事项：Hepg2细胞在无血清培养基中用氯丙嗪（7μg/mL）、非利平（1μg/mL）或阿米洛利（50μM）预处理1小时，然后用FITC-CHSP-NPs（0.15 mg/mL，2小时，37°C）处理。使用存在FITC-CHSP NPs但没有抑制剂治疗的组作为对照，其摄取量表示为100%*P（P）与对照值相比，<0.05。缩写：异硫氰酸荧光素标记的胆固醇修饰普鲁兰多糖；HepG2，肝细胞癌；NP，纳米颗粒。
图10
图10
使用免疫荧光染色确定高尔基体（giantin）、内质网（Calnexin）和溶酶体（LAMP2）的CHSP NPs在指定时间内胞内转运的共焦图像。注意事项：用DAPI染色（蓝色）标记每个细胞的细胞核。未观察到NP（绿色）与高尔基体（Giantin，红色）或ER（Calnexin，红色）的显色作用。相反，在1小时时发现NP与溶酶体（LAMP2，合并图像中的黄色）共定位。比例尺=20μm。缩写：CHSP、胆固醇修饰普鲁兰多糖、LAMP2、溶酶体相关膜蛋白2；NP，纳米颗粒。
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