跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https系统

该站点是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2013年5月9日；4（5）：e626。
doi:10.1038/cddis.2013.150。

蛋白酪氨酸磷酸酶1B在对乙酰氨基酚诱导的肝毒性中调节GSK3β/Nrf2和IGFIR信号通路

M A Mobasher先生 1, 冈萨雷斯-罗德里格斯, B桑塔马利亚, 拉莫斯, 马汀, L戈雅, P雷达, L莱齐格, L P詹姆斯, 阿卡德拉多, 马丁·佩雷斯, K J辛普森, J Muntané, A M Valverde公司
附属机构

蛋白酪氨酸磷酸酶1B在对乙酰氨基酚诱导的肝毒性中调节GSK3β/Nrf2和IGFIR信号通路

M A Mobasher先生等。 细胞死亡病. .

摘要

对乙酰氨基酚（APAP）中毒继发的急性肝衰竭与高死亡率相关。蛋白酪氨酸磷酸酶1B（PTP1B）是酪氨酸激酶生长因子信号转导的负调控因子。在肝脏中，这一途径提供保护，防止损伤。然而，PTP1B参与APAP激活的细胞内网络尚不清楚。我们评估了人类APAP诱导的肝衰竭中PTP1B的表达及其在调节人和小鼠肝细胞细胞死亡和存活之间平衡的分子机制中的作用，以及在APAP诱导肝毒性的小鼠模型中的作用。在APAP过量患者肝移植过程中切除的人肝组织中，PTP1B表达增加。APAP上调人和小鼠原代肝细胞PTP1B，同时激活c-jun（NH2）末端激酶（JNK）和p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK），导致细胞死亡。相反，Akt磷酸化和抗凋亡Bcl2家族成员BclxL和Mcl1降低。小鼠PTP1B缺乏可保护肝细胞免受APAP诱导的细胞死亡，防止谷胱甘肽耗竭、活性氧（ROS）生成以及JNK和p38 MAPK的激活。APAP处理的PTP1B（-/-）肝细胞通过糖原合成酶激酶3（GSK3）β/Src激酶家族（SKF）轴表现出增强的抗氧化防御能力，延迟转录因子核因子-红细胞生成素2相关因子（Nrf2）的酪氨酸磷酸化及其核排斥、泛素化和降解。在经APAP处理的野生型肝细胞中，胰岛素样生长因子-I受体介导的信号传导降低，但在PTP1B（-/-）细胞或通过RNA干扰降低PTP1B水平的野生型肝脏中保持不变。同样，两种信号级联在小鼠中都被调节，导致PTP1B（-/-）小鼠中APAP肝毒性较轻。我们的结果表明，PTP1B是APAP在肝毒性中触发的机制的中心参与者，这表明了一种新的治疗APAP诱导肝衰竭的靶点。

PubMed免责声明

数字

图1
图1
在APAP诱导的肝损伤和经APAP治疗的人原代肝细胞中，PTP1B表达增加。(一)组织学正常肝（NL）或APAP过量（APAP）患者肝活检切片的代表性抗PTP1B免疫染色(n个=7). 条形=50 μ米(b)用不同剂量的APAP（5–20 mM）用于24 h.用PTP1B抗体和β-肌动蛋白作为加载控件。通过扫描密度计对相应的自射线照片进行定量。结果为平均值±S。E.M.公司*P（P）<0.05和***P（P）<0.005 APAP处理与未经处理的细胞。APAP治疗后的典型相控显微镜图像。条形=100 μ米(c（c）)人类原代肝细胞用20 不同时间段（4、8和24）的mM APAP h） ●●●●。用PTP1B和PTP1B抗体对总细胞裂解物进行western blot分析β-肌动蛋白作为加载控件。通过扫描密度计对相应的自射线照片进行定量。结果为平均值±S。E.M.公司*P（P）<0.05 APAP治疗与未经处理的细胞。APAP治疗后的典型相控显微镜图像。条形=100 μ米(d日)用不同剂量的APAP处理人原代肝细胞24小时 用抗磷酸化（p）-JNK1/2、JNK1/2、磷酸化-p38、p38、活性胱天蛋白酶-3、磷酸化Akt、Akt、BclxL、Mcl1和p85-PI3K的抗体作为负载对照，通过蛋白质印迹分析h和总细胞裂解物*P（P）<0.05和***P（P）<0.005 APAP处理与非处理细胞(n个=3个独立实验）
图2
图2
PTP1B缺陷的原代肝细胞可抵抗APAP诱导的细胞死亡。(一，左侧面板）野生型（PTP1B+/+)用10 mM APAP用于各种时间段。western blot分析PTP1B的表达*P（P）<0.05 APAP治疗与非处理细胞(n个=3个独立实验）。（右面板）典型的相控显微镜图像和流式细胞术分析G0/G1以下细胞群的百分比。(b)PTP1B型+/+和PTP1B−/−用APAP处理原代肝细胞（5和10 mM）用于16 h.（左面板）典型的相控显微镜图像。条形=100 μm.（右侧面板）细胞活力和释放的LDH活性。(c（c）)PTP1B型+/+和PTP1B−/−用APAP处理原代肝细胞（5和10 mM）用于16 h.（左面板）DAPI染色后的典型核形态学图像和荧光显微镜分析。（右面板）凋亡细胞核的量化。子G的百分比0/G公司1流式细胞术分析细胞群。(d日，左侧面板）PTP1B+/+和PTP1B−/−用APAP处理原代肝细胞（5和10 mM）用于16 h.抗细胞色素蛋白免疫印迹C类和抗细胞色素C类线粒体提取物中的氧化酶抗体。（右侧面板）PTP1B+/+和PTP1B−/−用APAP（10 mM）。半胱天冬酶-3酶活性分析*P（P）<0.05, **P（P）<0.01和***P（P）<0.005 PTP1B−/− 与PTP1B型+/+(n个=4个独立实验）
图3
图3
PTP1B缺乏对肝细胞应激和生存信号的影响。(一，左侧面板）PTP1B+/+和PTP1B−/−用APAP（10 mM）。用抗磷酸化（p）-JNK1/2、JNK1/2、磷酸化p38 MAPK和p38 MAPK抗体对总细胞裂解物进行western blot分析。显示了与三个独立实验相对应的代表性自动放射自显影图。（右侧面板）PTP1B+/+和PTP1B−/−用APAP（5和10）处理小鼠原代肝细胞 mM）用于16 h.用抗磷酸化（p）-IGFIR、IGFIR、IRS1、IRS2、磷酸化Akt、Akt，BclxL、Mcl1和β-肌动蛋白作为加载控件。显示了与三个独立实验相对应的代表性自动放射自显影图。(b)PTP1B型+/+和PTP1B−/−用不同剂量的APAP处理永生化肝细胞16 h.用所示抗体通过western blot分析总细胞裂解物。显示了与三个独立实验相对应的代表性自动放射自显影图。(c（c）)永生PTP1B+/+转染10的肝细胞 nM对照或PTP1B小干扰RNA（siRNA）48 h进一步用不同剂量的APAP治疗16 h.用所示抗体通过western blot分析总细胞裂解物。显示了与三个独立实验相对应的代表性自动放射自显影图
图4
图4
PTP1B缺乏保护肝细胞免受GSH耗竭和ROS升高的影响；对核Nrf2积累的影响。PTP1B型+/+和PTP1B−/−用不同剂量的APAP处理永生化肝细胞不同时间段。(一)谷胱甘肽含量分析（4 h） ROS水平（6 h） GPx和GR活性（16 h） 在三个独立的实验中*P（P）<0.05, **P（P）<0.01和***P（P）<0.005 PTP1B−/− 与PTP1B型+/+(b，上面板）通过PTP1B中的western blot分析核细胞裂解物中的Nrf2+/+和PTP1B−/−1处理永生化肝细胞 mM APAP用于几个时间段。显示了三到四个独立实验的代表性自动放射自显影图。（下面板）PTP1B中Nrf2细胞内定位的代表性图像+/+和PTP1B−/−1处理永生化肝细胞 mM APAP用于几个时间段。条形=50 μ米(c（c）)（上面板）PTP1B+/+和PTP1B−/−用1 mM APAP用于几个时间段。用抗Nrf2抗体免疫沉淀法分析Nrf2酪氨酸磷酸化，然后用抗Tyr（P）抗体免疫印迹法分析。western blot分析总Nrf2和HO-1。（下面板）PTP1B+/+和PTP1B−/−用10 mM APAP用于各种时间段。通过蛋白质印迹分析总Nrf2和HO-1。(d日)PTP1B型+/+和PTP1B−/−永生化肝细胞用MG132（10 nM）30 min，然后是1 mM APAP用于不同的时间段。全细胞裂解产物用抗Nrf2抗体免疫沉淀法分析，然后用抗泛素抗体免疫印迹法分析。(e（电子）)在转染pcDNA3.1mNrf2-V5/HisB表达载体和3×ARE-Luc联合myc-PTP1B的HEK 293T细胞中检测抗氧化反应元件（ARE）介导的荧光素酶活性 h.tBHQ（15 μM） 用作阳性对照(n个=3个独立实验，一式三份）***P（P）<0.005 PTP1B转染（Nrf2 ARE+PTP1B）与空载体转染（Nrf2 ARE）细胞
图5
图5
PTP1B调制GSK3β/APAP处理肝细胞中Src-Fyn介导的Nrf2核积聚。(一)PTP1B型+/+用对照组或GSK3转染永生化肝细胞β小干扰RNA（siRNAs）（25 nM）48 h、 然后用1刺激 mM APAP公司。用Nrf2、Fyn和Src抗体对细胞核和细胞溶质提取物进行western blot分析。(b，上面板）PTP1B+/+永生化肝细胞用PP2（5 μM） 对于30 1分钟后 mM APAP用于不同时期。western blot分析核提取物中的Nrf2。（下面板）SYF−/−MEF用1 western blot分析核提取物中不同时期的mM-APAP和Nrf2。(c（c）)PTP1B型+/+和PTP1B−/−永生化肝细胞用1 mM APAP用于不同时期。western blot分析细胞溶质提取物中磷酸化GSK3β（Tyr216）。对细胞核提取物中的Fyn和Src进行了分析。在三个独立的实验中也得到了类似的结果
图6
图6
PTP1B缺陷小鼠可抵抗APAP诱导的炎症氧化应激和肝脏损伤。PTP1B型+/+和PTP1B−/−给小鼠注射300 mg/kg APAP或生理盐水6或24 小时(一)24天后的生存曲线 APAP注射h。(b)6和24时的ALT活性 小时(c（c）)PTP1B的代表性全肝图像+/+和PTP1B−/−小鼠24 APAP注射后h。(d日)IL6、IL1β和TNFα通过实时聚合酶链反应测定PTP1B肝脏中的mRNA水平+/+和PTP1B−/−6岁的老鼠 APAP注射后h。(e（电子）)PTP1B肝脏中代表性的抗PTP1B免疫染色（左侧）和苏木精伊红染色（右侧）+/+和PTP1B−/−小鼠6 APAP注射后h。条形=100 μ米(（f）)对来自PTP1B的肝脏中的GSH（左面板）、APAP蛋白加合物（中面板）和羰基化蛋白水平（右面板）进行分析+/+和PTP1B−/−注射APAP后不同时间段的小鼠*P（P）<0.05, **P（P）<0.01和***P（P）<0.005 PTP1B−/− 与PTP1B型+/+(n个=每种情况下6-8只小鼠）。半胱氨酸、半胱氨酸。车辆，车辆
图7
图7
PTP1B缺乏对Nrf2介导的肝脏抗氧化反应和存活信号传导的诱导的有益作用。PTP1B型+/+和PTP1B−/−给小鼠注射300 mg/kg APAP或生理盐水3或6次 小时(一)核提取物中Nrf2和总肝提取物中HO-1、磷酸（p）-JNK和JNK的Western blot分析。(b)通过定量实时聚合酶链反应（qRT-PCR）测定3和6时的GPx、HO-1、GCL-M、GCL-C和NQO1 mRNA水平 APAP注射后h*P（P）<0.05, **P（P）<0.01和***P（P）<0.005 PTP1B−/− 与PTP1B型+/+(n个=每种情况下6-8只小鼠）。(c（c）)PTP1B总肝提取物中磷酸化（p）-IGFIR、IGFIR、IRS1、IRS2、磷酸化Akt、Akt和BclxL水平的Western blot分析+/+和PTP1B−/−小鼠6 APAP注射后h。(d日)说明PTP1B调节Nrf2核积累的拟议机制的示意图。PTP1B可能激活GSK3上游未知激酶β通过去磷酸化，从而激活GSK3β/细胞核中的Src-Fyn轴最终导致Nrf2酪氨酸磷酸化、泛素化和降解。车辆、车辆
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

查看所有“被引用”文章

工具书类

    1. Rumack BH.对乙酰氨基酚的误解。肝病学。2004年；40:10–15.-公共医学
    1. 李WM。醋氨酚和美国急性肝衰竭研究小组：降低肝衰竭风险。肝病学。2004年；40:6–9.-公共医学
    1. Litovitz TL、Klein-Schwartz W、White S、Cobaugh DJ、Youniss J、Omslaer JC等，2000年美国毒物控制中心协会毒物暴露监测系统年度报告。2001年美国急诊医学杂志。19:337–395.-公共医学
    1. 李WM。对乙酰氨基酚毒性：改变对社会/医学问题的看法。肝病学。2007;46:966–970.-公共医学
    1. 卡普维茨N.醋氨酚肝毒性：我们知道什么，我们不知道什么，接下来我们该怎么做。肝病学。2004年；40:23–26.-公共医学

出版物类型

MeSH术语