Oxidative stress mediates the disruption of airway epithelial tight junctions through a TRPM2-PLCγ1-PKCα signaling pathway

doi:10.3390/ijms14059475

。2013年4月29日；14(5):9475-86.

doi:10.3390/ijms14059475。

氧化应激通过TRPM2-PLCγ1-PKCα信号通路介导气道上皮紧密连接的破坏

芮旭（Rui Xu）¹, 李琦, 周向东, 朱利·佩雷尔曼, 维克托·科洛索夫

附属公司

PMID： 23629676
预防性维修识别码：下午3676794
内政部： 10.3390/ijms14059475

氧化应激通过TRPM2-PLCγ1-PKCα信号通路介导气道上皮紧密连接的破坏

芮旭（Rui Xu）等。国际分子科学杂志。 2013。

。2013年4月29日；14(5):9475-86.

doi:10.3390/ijms14059475。

作者

芮旭（Rui Xu）¹, 齐丽, 周向东, 朱利·佩雷尔曼, 维克托·科洛索夫

附属

¹重庆医科大学附属第二医院呼吸内科，重庆400010。zxd999@263.net。

PMID： 23629676
预防性维修识别码：项目经理3676794
内政部： 10.3390/ijms14059475

摘要

氧化应激被认为是几种肺部炎症疾病发病机制中的一个重要因素。先前的研究表明氧化应激与上皮紧密连接（TJs）的衰减之间存在关系。在人支气管上皮16细胞（16HBE）中，我们证明了闭塞小带-1（ZO-1）的降解，而克劳丁-2表现出对瞬时受体电位美拉司他丁（TRPM）2通道、磷脂酶Cγ1（PLCγ1）和蛋白激酶Cα（PKCα）信号级联的激活有很大依赖性。

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图1
通过Western blot分析评估PLCγ1和PKCα的活性。(A类)与对照siRNA转染相比，在存在特定TRPM2 siRNA的情况下，瞬时受体电位（TRPM）-2的表达水平降低了>80%；(B)通过蛋白质印迹分析检测酪氨酸783处的PLCγ1和磷酸化的PLCγ1。蛋白质水平相对于β-肌动蛋白进行了标准化。16HBE细胞经H处理₂O（运行）₂游离DMEM 4h作为阴性对照。(n个=每种情况下为6）*第页TRPM2 siRNA转染+H时<0.05₂O（运行）₂接触组和阴性对照组；(C类)在颗粒提取物和可溶性提取物中均检测到PKCα。为了研究TRPM2缺失是否会影响PKCα的活性，将TRPM2特异性siRNA或对照siRNA转染到16HBE细胞。(n个=每种情况下为6），^#第页>与对照组相比，0.05；(D类)在颗粒提取物和可溶性提取物中均检测到PKCα。16HBE细胞经H处理₂O（运行）₂-设游离DMEM 4h为阴性对照(n个对于每个条件＝6）*第页<0.05，与阴性对照组相比**第页<0.05，与U73122+H相比₂O（运行）₂组或阴性对照。

图1
通过Western blot分析评估PLCγ1和PKCα的活性。(A类)与对照siRNA转染相比，在存在特定TRPM2 siRNA的情况下，瞬时受体电位（TRPM）-2的表达水平降低了>80%；(B)Western blot分析检测酪氨酸783处的PLCγ1和磷酸化PLCγ1。蛋白质水平相对于β-肌动蛋白进行了标准化。16HBE细胞经H处理₂O（运行）₂游离DMEM 4h作为阴性对照。(n个=每种情况下为6）*第页对于TRPM2 siRNA转染+H，<0.05₂O（运行）₂接触组和阴性对照组；(C类)在颗粒提取物和可溶性提取物中均检测到PKCα。为了研究TRPM2缺失是否会影响PKCα的活性，将TRPM2特异性siRNA或对照siRNA转染到16HBE细胞。(n个=每种情况下为6），^#第页>与对照组相比，0.05；(D类)在颗粒提取物和可溶性提取物中均检测到PKCα。用H处理的16HBE细胞₂O（运行）₂-设游离DMEM 4h为阴性对照(n个=每种情况下为6）*第页<0.05，与阴性对照组相比**第页<0.05，与U73122+H相比₂O（运行）₂组或阴性对照。

图2
外源H的影响₂O（运行）₂单独地或与TRPM2-siRNA、U73122或Go-6976在16HBE细胞中的TER上组合。暴露于H后各组的TER值₂O（运行）₂，均归一化为H治疗后阴性对照的平均值₂O（运行）₂释放DMEM 4小时(n个=每种情况下为6）*第页与对照组相比<0.05**第页与H相比<0.05₂O（运行）₂小组。

图3
western blot分析检测紧密连接（TJ）蛋白家族ZO-1和claudin-2的表达水平。结果根据β-肌动蛋白水平进行了标准化，并调整为阴性对照。16HBE细胞暴露于H₂O（运行）₂游离DMEM 4h作为阴性对照。(n个=每种情况下为6）*第页与未进行任何预处理的组相比，<0.05。^#第页>与未进行任何预处理的组相比，0.05。

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1. Van Itallie C.M.，Anderson J.M.紧密连接孔的分子生理学。生理学。2004;19:331–338.-公共医学
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