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.2013年6月；61(6):444-61.
doi:10.1369/0022155413484765。 Epub 2013年3月12日。

细胞内凝胶溶解活性和基质金属蛋白酶2的组织和细胞特异性共定位

安·伊伦·索利 1, Bodil Fadnes公司, Jan-Olof Winberg公司, 拉尔斯·乌林·汉森, 艾琳·哈德勒·奥尔森
附属公司

细胞内凝胶溶解活性和基质金属蛋白酶2的组织和细胞特异性共定位

安·伊伦·索利等。 组织化学与细胞化学杂志. 2013年6月.

摘要

基质金属蛋白酶2（MMP-2）是一种降解细胞外基质蛋白的蛋白水解酶。最近的研究表明，MMP-2在各种病理条件下，如心脑缺血损伤和肿瘤生长期间，也在细胞内蛋白水解中发挥作用。本研究旨在绘制生理条件下细胞内MMP-2活性在不同小鼠组织和细胞中的分布。对来自正常大脑、心脏、肺、肝、脾、胰腺、肾、肾上腺、甲状腺、性腺、口腔粘膜、唾液腺、食道、肠道和皮肤的样本进行高分辨率原位明胶酶谱和免疫组织化学染色。在肝细胞、心肌细胞、肾小管细胞、口腔粘膜上皮细胞、唾液腺排泄管上皮细胞和肾上腺皮质细胞中，我们发现金属蛋白酶抑制剂EDTA显著降低了强烈的细胞内凝胶溶解活性，而半胱氨酸蛋白酶抑制剂E-64则没有显著降低。此外，凝胶溶解活性与MMP-2共定位。Western blotting和电子显微镜结合免疫金标记显示MMP-2存在于分离肝细胞的不同细胞间隔中。我们的结果表明，MMP-2在生理条件下参与特定组织和细胞的细胞内蛋白水解。

关键词：基质金属蛋白酶2；胶溶活性；平衡；细胞内。

PubMed免责声明

利益冲突声明

利益冲突声明：作者声明，与本文的研究、作者身份和/或出版没有潜在的利益冲突。

数字

图1。
图1。
锌基固定剂（ZBF）-心脏（A–C）、肾皮质（D–F）和肾髓质（G–I）的固定部分。基质金属蛋白酶2（MMP-2）的免疫组织化学（IHC）染色显示在左侧车道（A、D和G），呈棕色；细胞核被苏木精染成蓝色。中间通道（B、E和H）显示了未添加抑制剂的明胶原位酶谱，右侧通道（C、F和I）显示了20 mM EDTA的明胶就地酶谱。凝胶溶解活性被视为绿色荧光；DAPI将细胞核染成蓝色。在D到F中，肾小球被标记全球在G到I中，肾乳头被标记快速成型.比例尺：50µm。
图2。
图2。
锌基固定剂（ZBF）-肝脏（A–C）、口腔粘膜（D–F）和唾液腺（G–I）的固定切片。基质金属蛋白酶2（MMP-2）的免疫组织化学（IHC）染色显示在左侧车道（A、D和G），呈棕色；细胞核被苏木精染成蓝色。中间通道（B、E和H）显示了未添加抑制剂的明胶原位酶谱，右侧通道（C、F和I）显示了20 mM EDTA的明胶就地酶谱。凝胶溶解活性被视为绿色荧光；细胞核被DAPI反染成蓝色。在D到F中，上皮衬里被标记电动自行车，上皮的角化层用点画线标记，固有层被标记低压在G至I中，黏液腺泡的例子被标记妈妈和排泄管预计起飞时间.比例尺：50µm。
图3。
图3。
锌基固定剂（ZBF）-气管（A–C）、肺（D–F）和小肠（G–I）的固定部分。基质金属蛋白酶2（MMP-2）的免疫组织化学（IHC）染色显示在左侧车道（A、D和G），呈棕色；细胞核被苏木精染成蓝色。中间通道（B、E和H）显示了未添加抑制剂的明胶原位酶谱，右侧通道（C、F和I）显示了20 mM EDTA的明胶就地酶谱。凝胶溶解活性被视为绿色荧光；DAPI将细胞核染成蓝色。在A到C中，呼吸上皮被标记重新，腺体已标记全球，软骨被标记氯，平滑肌被标记平方米在D到F中，细支气管被标记br个在G到I中，肠上皮被标记电动自行车和固有层低压.比例尺：50µm。
图4。
图4。
锌基固定剂（ZBF）——肾上腺（A–C）、甲状腺（D–F）和睾丸单个生精小管（G–I）的固定切片。基质金属蛋白酶2（MMP-2）的免疫组织化学（IHC）染色显示在左侧车道（A、D和G），呈棕色；细胞核被苏木精染成蓝色。中间通道（B、E和H）显示了未添加抑制剂的明胶原位酶谱，右侧通道（C、F和I）显示了添加20 mM EDTA的明胶就地酶谱。凝胶溶解活性被视为绿色荧光；细胞核被DAPI反染成蓝色。在A到C中，肾上腺的外皮质被标记oc公司，内皮层被标记集成电路，髓质被标记医学.比例尺：50µm。
图5。
图5。
锌基固定剂（ZBF）——食管（A-C）、卵巢（D-F）和输卵管（G-I）的固定部分。基质金属蛋白酶2（MMP-2）的免疫组织化学（IHC）染色显示在左侧车道（A、D和G），呈棕色；细胞核被苏木精染成蓝色。未添加抑制剂的明胶原位酶谱显示在中间泳道（B、E和H）中，使用20mM EDTA的明胶原位酶谱显示在右侧泳道（C、F和I）中。凝胶溶解活性被视为绿色荧光；细胞核被DAPI反染成蓝色。在D到F中，标记了次封装区域扫描电子显微镜.比例尺：50µm。
图6。
图6。
锌基固定剂（ZBF）——大脑小脑（A-C）和海马（D-F）以及大肠（G-I）的固定部分。基质金属蛋白酶2（MMP-2）的免疫组织化学（IHC）染色显示在左侧车道（A、D和G），呈棕色；细胞核被苏木精染成蓝色。中间通道（B、E和H）显示了未添加抑制剂的明胶原位酶谱，右侧通道（C、F和I）显示了20 mM EDTA的明胶就地酶谱。凝胶溶解活性被视为绿色荧光；DAPI将细胞核染成蓝色。在A到C中，小脑的分子层被标记毫升，颗粒层被标记全球髓质被标记米在G到I中，大肠内腔被标记卢.比例尺：50µm。
图7。
图7。
锌基固定剂（ZBF）-胰腺（A–C）和皮肤（D–F）的固定部分。基质金属蛋白酶2（MMP-2）的免疫组织化学（IHC）染色显示为A，呈棕色；细胞核被苏木精染成蓝色。B中显示了不含抑制剂的明胶原位酶谱，C中添加了20 mM EDTA的明胶就地酶谱。明胶溶解活性被视为绿色荧光；DAPI将细胞核染成蓝色。在D到F中，皮脂腺被标记新加坡图片顶部的卷曲层（由E和F中的强荧光线标记）是角化上皮层。比例尺：50µm。
图8。
图8。
（A-D）锌基固定剂（ZBF）-固定的石蜡包埋分离肝细胞切片。基质金属蛋白酶2（MMP-2）和基质金属蛋白酶9（MMP-9）在A和B中的免疫组织化学染色分别为棕色。细胞核被苏木精染成蓝色。在C和D中分别可见不含和含20 mM EDTA的原位明胶酶谱。凝胶溶解活性被视为绿色荧光，而细胞核被DAPI染成蓝色。A–D中的比例尺：50µm。（E） 福尔马林固定分离肝细胞的电子显微镜免疫金MMP-2标记。MMP-2标记可见小的、圆形的黑色斑点。细胞核被标记努，标记了线粒体的例子米，内质网被标记呃.比例尺：0.5µm。
图9。
图9。
肝细胞组分和全细胞裂解物通过SDS-PAGE明胶酶谱A和western blotting还原条件评估B和C中基质金属蛋白酶2（MMP-2）和基质金属蛋白酶9（MMP-9）。微孔标记：S1：结合MMP-2和MMP-9标准；S2:MMP-2标准（左右面板使用两个不同批次）；S3:MMP-9标准；C： 胞质部分；M： 膜组分；N： 核分数；五十： 全细胞裂解物；先生：分子量阶梯。标记为“未纯化”的凝胶装载有未在明胶-琼脂糖柱中纯化的样品；标记为“未净化+EDTA”的凝胶加载相同的样品，但在洗涤和培养缓冲液中添加10 mM EDTA；标记为“明胶结合”的凝胶中装入了与明胶-琼脂糖柱结合的样品；并将标记为“流通”的凝胶装入未与明胶-Sepharose柱结合的流通部分。
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