跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

点政府

政府意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息,确保你在联邦政府政府网站。

Https系统

该站点是安全的。
这个https(https)://确保您连接到官方网站,并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2013年2月19日;2(2):e73。
doi:10.1038/mtna.2012.64。

局部超声诱导BBB开放法向大鼠脑内传递AAV2/1转基因

附属公司

局部超声诱导BBB开放法向大鼠脑内传递AAV2/1转基因

安吉丽卡·阿隆索等。 摩尔热核酸. .

摘要

血脑屏障(BBB)阻碍药物和大分子向中枢神经系统(CNS)的输送。已经使用了几种方法来克服这一障碍,以促进各种中枢神经系统疾病的治疗。我们现在展示的结果表明,含有LacZ基因编码区的嵌合腺相关病毒2/1(AAV2/1)颗粒在血管声谐振器存在下通过聚焦超声打开BBB后,经静脉(IV)给药可有效地传递至大鼠大脑。我们证明,转基因在位于内嵌病灶附近的细胞中正确有效地表达,特别是在小血管和毛细血管附近。组织化学LacZ染色可以鉴定大量表达酶活性蛋白的细胞。使用抗微管蛋白III和细菌LacZ抗体的双重免疫荧光(IF),我们确定这些细胞主要是神经元。一小部分转导的细胞被识别为胶质细胞,在IF中与抗星形细胞标记物抗体反应阳性。这些结果表明,我们的方法可以在超声诱导的BBB开放后,在大鼠大脑中实现静脉注射转基因的非常特异、局部和有效的表达。分子治疗-核酸(2013)2,e73;doi:10.1038/mtna.2012.64;2013年2月19日在线发布。

PubMed免责声明

数字

图1
图1
BBB开口的实验设置和验证。()雄性Wistar大鼠的一个半球被500适用于立体定向定位系统的kHz换能器。传感器由函数/任意波形发生器和放大器驱动。(b条)为了证明BBB的成功开放,大鼠在内息30分钟后接受了磁共振成像。钆增强T1加权图像显示内吞部位的病灶有轻微的对比度增强(见箭头)。
图2
图2
转染细胞中β-半乳糖苷酶的组织化学证明。内吞一周后,进行组织化学检测β-半乳糖苷酶蛋白的酶活性,以证明蛋白质产物的正确加工。(,c(c),d日)由此产生的蓝色X-半乳糖染色产物可以在内脏半球的大部分位于皮质的斑点中检测到,部分位于毛细血管附近或形成血管壁一部分的细胞中(,请参见箭头)。相比之下(b条)在非超声半球未观察到β-半乳糖苷酶活性。放大倍数为:,b条, ×50;c(c), ×200;d日,×400。
图3
图3
β-半乳糖苷酶表达的免疫荧光显微镜。为了区分内源性和转导性β-半乳糖苷酶的表达,使用针对细菌β-半乳糖苷酶(与Alexa-488偶联,绿色)的抗体进行免疫荧光。放大倍数较低时(——c(c))可以检测到数百个表达β-半乳糖苷酶的细胞簇(放大×200),其中一些细胞围绕(b条)毛细血管或小血管或(c(c))在皮层表面。(d日,e(电子))在高倍镜下(放大×630),观察到广泛的点状染色模式,以及转导细胞的整个细胞质的更均匀染色。((f))对侧非超声半球未显示任何β-半乳糖苷酶表达。
图4
图4
抗微管蛋白III抗体的双重免疫荧光。要指定转导的细胞类型()β-半乳糖苷酶抗体(与Alexa-488偶联,绿色)和(b条)针对神经元标记蛋白tubulinIII(与Alexa-594偶联,红色)进行检测。(c(c))合并图显示,几乎所有β-半乳糖苷酶的表达都发生在微管蛋白III染色阳性的细胞中(见箭头),表明大多数转导的细胞是神经元。
图5
图5
抗GFAP抗体的双重免疫荧光。为了评估非神经胶质细胞的转导()β-半乳糖苷酶(与Alexa-488偶联,绿色)和(b条)研究了星形细胞标志蛋白GFAP(与Alexa-594偶联,红色)。(c(c))如合并图所示,一个GFAP阳性细胞显示β-半乳糖苷酶染色(见小箭头),而其他星形胶质细胞未显示与β-半乳糖苷酶共定位(见大箭头)。这些数据表明,一小部分转导细胞属于星形细胞系。
图6
图6
β-半乳糖苷酶表达的定量。()为了评估成功转导细胞的数量,对每个光场(of)中所有表达β-半乳糖苷酶的细胞进行计数。每个动物和大脑半球至少有10个OF(左半球;右半球)。(b条)同样,定义为每个of的正像素数的强度总和,对内插左半球和非内插右半球进行了量化。未注射重组病毒颗粒的对照动物的数值被省略,因为我们从未在这些动物中发现任何阳性反应细胞。

类似文章

引用人

工具书类

    1. Meairs S.和Alonso A.超声、微泡和血脑屏障。Prog Biophys分子生物学。2007;93:354–362.-公共医学
    1. 帕德里奇WM。血脑屏障:脑药开发的瓶颈。NeuroRx公司。2005;2:3–14.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Alonso A、Reinz E、Fatar M、Jenne J、Hennerici MG.和Meairs S.在聚焦超声诱导血脑屏障开放后,大鼠大脑中的神经元而非胶质细胞过度表达泛素。神经科学。2010;169:116–124.-公共医学
    1. Alonso A、Reinz E、Fatar M、Hennerici MG.和Meairs S。超声诱导血脑屏障开放后白蛋白的清除由胶质细胞而非神经细胞介导。大脑研究2011;1411:9–16.-公共医学
    1. Hynynen K、McDannold N、Vykhodtseva N和Jolesz FA。兔血脑屏障的非侵入性磁共振成像引导的局灶性开放。放射科。2001;220:640–646.-公共医学