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.2013年3月1日：232:90-105。
doi:10.1016/j.neuroscience.2012.018。 Epub 2012年12月20日。

帕金森氏症患者黑质纹状体中parkin溶解度降低与自噬受损有关

我是Lonskaya 1, M L希布伦 1, N K Algarzae公司 1, N Desforgs公司 1, C E-H穆萨 2
附属公司

帕金溶解度降低与散发性帕金森病黑质纹状体自噬障碍相关

我是Lonskaya等。 神经科学. .

摘要

帕金森氏病（PD）是一种运动障碍，涉及黑质致密部多巴胺能神经元的死亡。Parkin是一个在早发PD中突变的常染色体隐性基因。我们研究了Parkin和自噬清除在22例非家族性散发PD患者和15例对照标本死后黑质纹状体组织中的作用。Parkin不溶于散发性PD黑质纹状体细胞溶质表达的改变。Parkin的不溶性与泛素化蛋白缺乏降解以及α-突触核蛋白和Parkin在自噬体中的积累有关，表明PD存在自噬缺陷。为了测试Parkin对自噬清除的调节作用，我们使用慢病毒基因转移在大鼠纹状体中表达带有α-突触核蛋白的人类野生型或突变型parkin（T240R）。α-突触核蛋白的慢病毒表达导致自噬空泡的积聚，而parkin与α-突触核蛋白的共同表达促进了自噬清除。亚细胞分馏显示，在基因转移模型中，α-突触核蛋白和tau超磷酸化（p-tau）在自噬体中积累，类似于在PD脑中观察到的效果，但parkin表达导致蛋白质沉积到溶酶体中。然而，帕金功能丧失突变并不影响自噬清除。综上所述，这些数据表明功能性帕金调节自噬体清除，而帕金溶解度降低可能会改变散发性PD的正常自噬。

PubMed免责声明

利益冲突声明

利益冲突：作者声明与这份手稿没有任何利益冲突。

数字

图1
图1。帕金不溶于人类PD患者死后纹状体
A类). 直方图表示帕金森病患者和对照受试者尾状体内人类帕金的ELISA测量。B类). PD患者和对照组受试者的可溶性人死后纹状体裂解物的4-12%SDS-NuPAGE凝胶WB分析显示帕金（1标准印迹）和泛素化蛋白（2第与肌动蛋白负荷控制相比。C类). 直方图表示斑点的量化。D类). 4–12%SDS-NuPAGE凝胶的WB分析显示不溶性帕金（1标准蛋白印迹）、磷酸蛋白（2第印迹），泛素化蛋白（3第个印迹）和肌动蛋白（4第个螺栓）。E类). 直方图表示斑点的量化。星号表示明显不同。F类). 方框图代表了人类帕金森病患者和年龄匹配的对照组的个体样本。直方图为平均值±SD，表示为对照的%。方差分析、Neumann-Keuls多重比较或非参数t检验。P<0.05。N=12名PD患者和7名对照组受试者。
图2
图2。用人parkin和GFAP抗体对人体组织进行免疫染色
20μm厚石蜡包埋连续切片脑组织免疫染色A类). 人抗帕金蛋白（PRK8）染色和核标记DAPI反染色显示细胞溶质蛋白，B类). parkin和胶质标记GFAP联合染色显示星形胶质细胞中parkin表达，C类). 对照受试者尾状体内的TH染色。D类). Parkin染色和核标记DAPI反染色显示细胞溶质蛋白，E类). parkin和胶质标记GFAP联合染色显示星形胶质细胞中parkin表达，F类). PD/AD患者尾状体内TH染色。G公司). Parkin染色和DAPI复染显示细胞溶质蛋白，H（H）). parkin和胶质标记GFAP联合染色显示星形胶质细胞中parkin表达，我). 对照受试者中脑/SN中的TH染色。J型). Parkin染色和DAPI复染显示细胞溶质蛋白，K（K）). parkin和胶质标记GFAP联合染色显示星形胶质细胞中parkin表达，我). PD患者中脑/SN的TH染色。M（M）). 人抗帕金蛋白（AB5112）染色和核标记DAPI反染色显示细胞溶质蛋白，N个). 与parkin和胶质细胞标志物GFAP共染色，显示星形胶质细胞中parkin的表达，O（运行）). 对照受试者尾状体内的TH染色。
图3
图3。冷冻人帕金森病脑组织的亚细胞分离
A类). 人抗帕金蛋白（AB5112）染色和核标记DAPI反染色显示细胞溶质蛋白，B类). 神经元标记物MAP-2染色及DAPI和C类). 序列切片中合并的parkin和MAP-2染色D类). 对照对象中脑/序列号中的TH。E类). 人抗帕金蛋白（AB5112）染色和核标记DAPI反染色显示细胞溶质蛋白，F类). 神经元标记物MAP-2染色及DAPI和G公司). 序列切片中合并的parkin和MAP-2染色H（H）). 痴呆患者的中脑TH/SN。我). 对人类纹状体裂解物的4-12%SDS-NuPAGE凝胶进行WB分析，显示LC3-I和LC3-II的表达（第一个面板），LC3-B（第二个面板）与肌动蛋白负荷对照（底部面板）相比的表达J型). 直方图表示斑点的密度测定分析。K（K）). 亚细胞提取物中的蛋白质印迹显示AV-10和AV-20中的LC3-B和溶酶体部分中的LAMP-3，以及线粒体标记COX-IV和核标记PARP-1。图表表示亚细胞分馏和ELISA测量我). 人α-突触核蛋白，M（M）). 人类停车场和N个). 人类p-Tau（AT8）。星号表示与对照显著不同。方差分析，Neumann-Keuls与多重比较，P<0.05。N=12名PD患者和7名对照组受试者。
图4
图4。α-突触核蛋白的慢病毒表达导致p-Tau和parkin逆转这些效应
A类). 大鼠纹状体提取物4-12%SDS NuPAGE凝胶的WB分析显示parkin（顶部印迹）和α-突触核蛋白（中间印迹）的表达水平以及肌动蛋白水平（下部印迹）。B类). 直方图表示通过ELISA对人类α-突触核蛋白水平的量化。C类). 直方图表示人类停车活动的量化。D类). 大鼠p-Tau的ELISA测定。慢病毒20μm纹状体切片的硫黄素S染色E类). 停车场，F类)α-突触核蛋白和G公司). parkin+α-突触核蛋白注入大脑。慢病毒硫黄素-S连续切割20μm切片的人α-突触核蛋白染色K（K）). 停车场，我)α-突触核蛋白和M（M）). parkin+α-突触核蛋白注射大脑。星号表示明显不同。直方图为平均值±SD，表示为%对照。方差分析，Neumann-Keuls与多重比较，P<0.05。N=WB和ELISA每次治疗8只动物，IHC每次8只。
图5
图5。野生型，但不是T240R，帕金逆转α-突触核蛋白-诱导自噬体积累
注射A类). 慢病毒LacZ（Lv-LacZ）作为对照，B类). 慢病毒α-突触核蛋白（Lv-Syn），C类). 慢病毒parkin+慢病毒-α-突触核蛋白（Lv-Syn+Lv-Par），液泡含有碎片和D类). 慢病毒α-突触核蛋白+慢病毒T240R（Lv-Syn+Lv-T240R），星号表示自噬空泡。N＝8。图表表示亚细胞分馏和ELISA测量E类). α-突触核蛋白和F类). 基因转移动物模型中的p-Tau。方差分析，Neumann-Keuls与多重比较，P<0.05。N=5只动物/次亚细胞分离治疗。
图6
图6。功能停车场，不是突变体T240R，反转α-正常自噬的突触核蛋白改变。
A类). 对注射Lv-LacZ、Lv-Par、Lv-Syn和Lv-Par+Lf-Syn的大鼠纹状体裂解物的4-12%SDS-NuPAGE凝胶进行WB分析，结果显示，与肌动蛋白负荷控制（底部面板）相比，beclin-1（第一面板）、Atg7（第二面板）和Atg12（第三面板）的表达。B类). 对注射了Lv-LacZ、Lv-Par、Lv-Syn和Lv-Par+Lv-Sync的动物的大鼠纹状体脑裂解物进行WB分析，结果显示LC3-B（第一组）和HDAC6（第二组）的表达与肌动蛋白负荷控制（下组）相比。注射了C类). 慢病毒帕金（Lv-Par），D类)，慢病毒α-突触核蛋白（Lv-Syn）E类). 慢病毒parkin+慢病毒α-突触核蛋白（Lv-Par+Lv-Syn）和F类). 慢病毒T240R+慢病毒α-突触核蛋白（Lv-T240R+Lv-Syn）。G公司). 直方图表示纹状体LC3-B阳性细胞的体视学计数。F类). 4–12%SDS-NuPAGE凝胶与P62抗体的Western blot分析。星号表示明显不同。直方图为平均值±SD，转换为%对照。方差分析，Neumann-Keuls与多重比较，P<0.05。N=WB和ELISA每次治疗8只动物，IHC每次8只。
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    1. 伯恩斯议员、张磊、瑞贝克·GW、奎尔福特·HW、穆萨·CE。Parkin促进细胞内Abeta1-42清除。人类分子遗传学。2009;18:3206–3216.-项目管理咨询公司-公共医学
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