The light chains of microtubule-associated proteins MAP1A and MAP1B interact with α1-syntrophin in the central and peripheral nervous system

doi:10.1371/journal.pone.0049722

.2012;7（11）：e49722。

doi:10.1371/journal.pone.0049722。 Epub 2012年11月13日。

微管相关蛋白MAP1A和MAP1B的轻链与中枢和外周神经系统中的α1-同营养素相互作用

海克·富尔曼·斯特罗西格¹, 雷纳·诺伊格斯, 路易斯·德斯科维奇, 伊姆加德·菲舍尔, 道格拉斯·阿尔布雷希特, 法提哈·诺提亚斯, 斯坦利·C·弗罗纳, 弗里德里希·普洛斯特

附属公司

PMID： 23152929
预防性维修识别码：项目经理3496707
内政部： 10.1371/journal.pone.0049722

微管相关蛋白MAP1A和MAP1B的轻链与中枢和外周神经系统中的α1-同营养素相互作用

海克·富尔曼·斯特罗西格等。公共科学图书馆一号. 2012.

.2012;7（11）：e49722。

doi:10.1371/journal.pone.0049722。 Epub 2012年11月13日。

作者

海克·富尔曼·斯特罗西格¹, 雷纳·诺伊格斯, 路易斯·德斯科维奇, Irmgard Fischer公司, 道格拉斯·阿尔布雷希特, 法提哈·诺提亚斯, 斯坦利·C·弗罗纳, 弗里德里希·普洛斯特

附属

¹奥地利维也纳大学生物化学与细胞生物学系Max F.Perutz实验室。

PMID： 23152929
预防性维修识别码：项目经理3496707
内政部： 10.1371/日记.pone.0049722

摘要

MAP1家族的微管相关蛋白（MAP1A、MAP1B和MAP1S）具有高度保守的COOH末端结构域，长度约为125个氨基酸。我们进行了酵母2-杂交筛选，以寻找与该结构域相互作用的蛋白质，并鉴定了α1-同工酶，它是参与信号转导的适配器蛋白多基因家族的成员。我们进一步证明，保守的COOH末端125-氨基酸结构域（位于MAP1A、MAP1B和MAP1S的轻链中）与α1-同营养素之间的相互作用是直接的，并通过蛋白同源结构域2（PH2）发生α1-同营养素的突触后密度蛋白95/盘大/闭塞带-1蛋白同源结构域（PDZ）。我们通过两种蛋白在转染细胞中的共同定位和小鼠大脑的共同免疫沉淀实验证实了MAP1B和α1-同养蛋白的相互作用。此外，我们发现MAP1B和α1-同养蛋白在出生后发育期间和成年鼠坐骨神经的雪旺细胞中部分共存。然而，在MAP1B基因敲除小鼠中，α1-syntrophin和其他Schwann细胞蛋白（如ezrin和dystrophin-related protein 2（DRP2））的胞内定位以及Ranvier相关蛋白Caspr1/parandin的轴突节点的定位未受影响。我们的发现增加了越来越多的证据表明，经典MAP可能不仅通过直接调节微管功能，而且通过与信号转导蛋白的相互作用参与信号转导。

PubMed免责声明

利益冲突声明

竞争利益：提交人声明，不存在相互竞争的利益。

数字

**图2。α1-syntrophin与表达LC1的细胞中的微管结合。**
瞬时转染PtK2细胞，以表达EGF-标记的α1-syntrophin单独（a和b）或α1-syntropin和myc-标记的LC1（c–e）。细胞固定，微管蛋白共染色(*抗微管蛋白*)和LC1(*抗myc*)并用荧光显微镜进行分析。在缺乏外源性表达的LC1的情况下，α1-同养蛋白在细胞质中广泛分布（b）。当与LC1共表达时，发现α1-同营养蛋白与LC1在微管上共定位（c-e，箭头）。如前所述，LC1的表达导致微管捆扎。比例尺，20µm。

**图3。α1-同养蛋白存在于中枢和外周神经系统中与LC1的复合物中。**
从表达myc标记的LC1的转基因小鼠获得的脑蛋白提取物进行免疫沉淀(*IP（IP）*)都有抗myc抗体(*抗myc*)或无抗体(*无ab*; 阴性对照）。颗粒(*P（P）*)和相应的上清液(*S公司*)通过SDS-PAGE分级并通过免疫印迹分析(*工作分解结构*)使用抗吞咽素(*抗syn1351*)或抗myc抗体(*抗myc*). 显示了蛋白质大小标记物、合成营养素和LC1的位置。LC1对应的双谱带是由于凝胶电泳前变性不足所致。

**图4。MAP1B和同养蛋白共同定位于Ranvier和abaxonal Schwann细胞膜的节点。**
从4天开始准备坐骨神经(*第4天*)或14天(*14天*)老年人或成年人(成人)野生型(重量)和MAP1B^−/−(*击倒对手*)老鼠。如图所示，分离单个有髓鞘轴突并对其进行MAP1B（抗-HC750抗体）或合成蛋白（泛合成蛋白抗体抗-syn1351）染色。这些图片表示共焦Z堆栈的投影。出生后和成年雪旺细胞的MAP1B染色具有特异性，因为MAP1B的雪旺细胞中没有MAP1B^−/−老鼠。在所有年龄段，MAP1B都集中在Ranvier的节点(星号). 它也定位于基底膜(箭头)尤其是出生后第14天。在Ranvier淋巴结和abaxonal膜上也发现了Syntrophin。在成人中，它被发现局限于Cajal带(箭头)与之前的结果一致。MAP1B和同营养素的共定位在Ranvier淋巴结处最为显著，在abaxonal膜处发现部分共定位(箭头). 比例尺，20µm。

**图5。外周神经中DRP2、ezrin和Caspr1/paranodin的定位不受MAP1B缺乏的影响。**
从4天开始准备坐骨神经(*第4天*)或14天(*14天*)老年人或成年人(成人)野生型(重量)和MAP1B^−/−(*击倒对手*)老鼠。如图所示，分离单个有髓轴突并对其进行DRP2、ezrin或Caspr1/偏执蛋白染色。这些图片表示共焦Z堆栈的投影。兰维尔的节点(星号)和DRP2集群(箭头)在可能定义它们的地方进行了指示。Caspr1/偏执型蛋白染色在淋巴结处的差异是由于实际淋巴结区域中缺少蛋白质，该区域两侧有近端和远端偏执型室(箭头). 比例尺，20µm。

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