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比较研究
.2012年9月1日；44(17):829-42.
doi:10.1152/生理基因组学00060.2012。 Epub 2012年7月17日。

线粒体蛋白质组分析揭示Dahl盐敏感性大鼠Henle髓质厚升支氧利用不足

Nadezhda N Zheleznova公司 1, 春阳, 罗伯特·P·瑞恩, 布莱恩·德·哈利根, 梁明玉, 安德鲁·格林, 小艾伦·W·考利
附属公司
比较研究

线粒体蛋白质组分析揭示Dahl盐敏感性大鼠Henle髓质厚升支氧利用不足

Nadezhda N Zheleznova公司等。 基因组学杂志. .

摘要

Dahl盐敏感性（SS）大鼠的肾髓质厚升支（mTAL）是NaCl重吸收增强和超氧化物产生过量的部位。在本研究中，我们从SS和耐盐对照品系SS.13（BN）大鼠的mTAL中分离线粒体，在0.4和8%的盐饮食中连续7天，并进行蛋白质组学分析。mTAL和线粒体分离的纯度分别超过93.6%和55%。使用LC/MS光谱分析技术，我们在四个生物mTAL线粒体样品中鉴定出96个线粒体蛋白质，重复运行，如错误发现率<5%且扫描计数≥2的蛋白质所定义的。这96种蛋白质中的7种，包括IDH2、ACADM、SCOT、Hsp60、ATPA、EFTu和VDAC2在两个大鼠菌株之间有差异表达。耗氧量和高分辨率呼吸测定分析表明，与SS.13（BN）大鼠相比，高盐饮食喂养的SS大鼠外髓mTAL细胞和线粒体的氧利用率较低。这些研究将传统的蛋白质组学范式从只关注整个组织匀浆推进到关注单个细胞类型和特定亚细胞细胞器。研究结果揭示了mTAL线粒体代谢和氧利用不足在盐诱导高血压和肾髓质氧化应激中的重要作用。

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数字

图1。
图1。
髓厚升支（mTAL）整体消化质量。A类：mTAL隔离的代表性相控照片。B：使用抗Tamm-Horsfall蛋白（THP）抗体（mTAL标记物）对mTAL小管进行免疫荧光染色。
图2。
图2。
SS.13的mTAL中线粒体蛋白分离的质量BN编号胡扯。线粒体部分（Mit）与细胞溶质部分（Cyt）蛋白质表达的Western blot分析。MP，线粒体蛋白；内质网。
图3。
图3。
技术复制品的比较。高盐饮食喂养的SS大鼠mTAL分离的蛋白质丰度（扫描计数）的代表性比较。每个符号表示在一个样本的两次运行中观察到的独特蛋白质的定量。R表示的运行重复性2= 0.96.
图4。
图4。
SS和SS.13肾脏mTAL线粒体部分异柠檬酸脱氢酶[NADP]（IDH2）表达的Western blot分析BN编号大鼠喂食高盐饮食（8%NaCl连续7天；HS）（蛋白质组实验样品，5μg/车道）。A类：IDH2和Complex III亚单位核心2（CIII-Core2）Abs染色。B：IDH2蛋白的相对表达根据CIII-Core2线粒体蛋白的表达标准化*P（P）< 0.05.
图5。
图5。
SS和SS.13肾脏mTAL线粒体部分异柠檬酸脱氢酶[NADP]（IDH2）表达的Western blot分析BN编号大鼠喂食高盐饮食（8%NaCl，持续7天；HS）（来自IDH2活性测定的样品，5μg/泳道）。A类：IDH2 Abs染色。B：考马斯凝胶染色。C类：根据考马斯凝胶染色标准化IDH2蛋白的相对表达*P（P）< 0.05.
图6。
图6。
与SS.13相比，从SS mTAL分离的线粒体中测定IDH2活性BN编号喂食高盐饮食（8%NaCl，持续7天；HS）的大鼠*P（P）< 0.05.
图7。
图7。
mTAL细胞的耗氧量。A类：O的单个代表性实验总结2从SS和SS.13分离的mTAL消耗量BN编号大鼠喂食8%氯化钠饮食7天（HS），使用BD Falcon微孔板和嵌入式荧光探针进行测定。可以看出，在最初20分钟的测量中，O的速率2SS大鼠的mTAL摄入量减少，用增加率线性部分的斜率表示。B和C类：O比率的平均差异2从SS和SS分离的mTAL的消耗量13BN编号喂食高盐饮食的大鼠(B; 8%NaCl连续7天；HS）(n个=6个生物样品）或低盐饮食(C类; 0.4%氯化钠；LS）(n个=6个生物样品）表示为“上升”O的斜率差（假设线性）2响应[ΔNRFU（归一化相对荧光单位）]除以O稳态前的“运行”（Δ时间）2达到了消耗量（如A类). *P（P）< 0.05.
图8。
图8。
SS和SS.13外髓质（OM）分离线粒体的高分辨率呼吸测定（HRR）BN编号大鼠喂食高盐饮食（8%NaCl连续7天）（HS）。A类：HRR代表图：从SS和SS.13中分离出的500μg/2 ml线粒体蛋白BN编号将大鼠加入2ml培养箱中，在稳定状态后，用丙酮酸甲酯作为底物达到状态2.添加ADP后状态3实现了。ADP逐渐被磷酸化为ATP耗尽，呼吸下降状态4.B：线粒体平均呼吸状态3. *P（P）< 0.05.
图9。
图9。
改变mTAL能量导致O减少2SS大鼠的利用效率。与SS.13相比，SS大鼠分离的mTAL中6个线粒体蛋白的表达降低，1个增加（红色箭头）BN编号在高盐条件下（8%NaCl持续7天）。线粒体代谢缺陷导致NADH生成减少，O2消耗和氧化应激增加。异柠檬酸脱氢酶[NADP]；ATP合酶亚单位α；SCOT，琥珀酰辅酶A:3-酮酸辅酶A转移酶；EFTu，伸长率Tu；ACADM，中链特异性酰基辅酶A脱氢酶；热休克蛋白60，60kDa；VDAC，电压依赖型阴离子选择性。
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