跳到主页面内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https公司

该站点是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2011年7月；224(3):401-10.
doi:10.1002/path.288。 Epub 2011年5月5日。

膨胀的肝细胞增加声波刺猬的产量

Fatima Rangwala公司 1, 辛西娅·D·盖伊, 九一路, 铃木雅子, 詹姆斯·巴切特, Manal F阿卜杜勒马利克, 魏晨, 安娜·梅·迪尔
附属公司

膨胀的肝细胞增加声波刺猬的产量

法蒂玛·朗瓦拉等。 病理学杂志. 2011年7月.

摘要

气球状肝细胞区分非酒精性脂肪性肝炎（NASH）和脂肪变性。这种细胞含有扩张的内质网和泛素聚集体，具有内质网应激的特点。肝细胞膨胀增加了NASH纤维化的风险，表明膨胀的肝细胞释放促纤维化因子。刺猬配体在肝脏疾病中作为促纤维化因子发挥作用，但刺猬配基产生的机制尚不清楚。我们评估了内质网应激诱导肝细胞生成刺猬配体的假设，这些配体向邻近细胞提供旁分泌促纤维生成信号。在NASH患者的肝脏中，角蛋白8/18和泛素染色显示放大的角蛋白8/18阴性/泛素阳性肝细胞（气球状肝细胞）对Sonic hedgehog呈阳性。为了在体外模拟内质网应激，用衣霉素处理小鼠原代肝细胞。与载体相比，衣霉素显著增加了声波刺猬和印度刺猬的表达。此外，来自衣霉素处理的肝细胞的条件培养基比来自载体处理的肝细胞核的条件培养液增加了14倍以上的Gli-luciferase报告活性。环磷酰胺（刺猬信号传导抑制剂）消除了膜霉素处理肝细胞的条件培养基的作用，验证了可溶性肝细胞衍生因子激活刺猬的信号传导。NASH患者的气球状肝细胞不表达刺猬靶基因、Gli2、α-平滑肌肌动蛋白或波形蛋白，而是被表达这些肌成纤维细胞标记物的Gli2阳性基质细胞包围。三色染色显示在基质沉积区有膨胀的肝细胞聚集，并且声波刺猬阳性肝细胞的数量与膨胀程度和纤维化阶段相关。经受内质网应激的肝细胞产生刺猬配体，作为刺猬反应性基质细胞的旁分泌促成纤维因子。这些结果有助于解释为什么NASH中纤维化阶段与肝细胞膨胀相关。

PubMed免责声明

数字

图1
图1
非酒精性脂肪性肝炎（NASH，n=7）患者膨胀的肝细胞增加了Sonic hedgehog（Shh）配体的表达。（A） NASH苏木精-伊红（H&E）染色切片显示肝细胞膨胀（箭头所示）；角蛋白8/18（K8/18）免疫组织化学（IHC）染色切片显示肝细胞膨胀，失去正常、均匀、深色的细胞质角蛋白染色（箭头所示）；K8/18加上泛素双重IHC染色切片显示气球状肝细胞，其对正常棕色染色质标记的角蛋白染色呈阴性，但对核周红色染色质标记的泛素化蛋白聚集体呈阳性（Mallory-Denk体）；声波刺猬（Shh）的IHC染色切片显示肝细胞膨胀，Shh染色阳性。（B） 正常人肝组织切片IHC染色显示肝细胞外观正常，缺乏Shh染色。所有图像放大40倍。
图2
图2
α1-抗胰蛋白酶缺乏症（A1AT）患者肝细胞中Sonic hedgehog（Shh）配体和内质网（ER）应激标记物BiP的表达增加。对3例A1AT患者的肝组织进行苏木精-伊红（H&E）和周期性酸性Schiff-淀粉酶（PAS）染色。存在具有特征性A1AT内含物（箭头）的肝细胞。Sonic hedgehog（Shh；arrow）和BiP（arrow。K8/18加泛素（K8/18+泛素）双重IHC染色切片显示肝细胞膨胀，正常棕色素标记角蛋白染色阴性，核周红色素标记泛素化蛋白聚集体阳性（箭头；Mallory-Denk小体）。所有图像放大40倍。
图3
图3
肝细胞内质网应激体外模型中刺猬配体的产生和释放增加。从野生型小鼠中分离出原代肝细胞，并在12.5μg/ml或25μg/ml Tunicamycin（TM）或载体对照（DMSO）存在下培养6小时或24小时，如图所示。（A） BiP、角蛋白8/18（K8/18）、泛素和层粘连蛋白的代表性蛋白质印迹分析（负荷控制）。（B） 通过定量逆转录-PCR分析评估声波刺猬（Shh）和印度刺猬配体（Ihh）的表达。在每次实验中，细胞被分成三份。对三个实验的结果进行平均，并绘制平均值±SD结果。（与DMSO处理的细胞相比，*p<0.05）。（C） Shh、Ihh或lamin的代表性蛋白质印迹分析（负荷控制）。（D） Shh和Ihh-western blots结果的累积密度分析（按照层粘连负荷控制标准化）显示为平均值±SD（**p<0.05，与DMSO处理的细胞相比）（E）肝细胞是从野生型小鼠中分离出来的，并在25μg/ml Tunicamycin或DMSO存在下培养24小时。收集肝细胞条件培养基。将Shh-LightII细胞与一个Gli-responsive Firefly荧光素酶报告子和一个pRL-TK组成性Renilla荧光素酶报告子稳定共转染，然后在对照培养基、Shh阳性对照培养基和肝细胞条件培养基（来源于经DMSO或25μg/ml Tunicamycin处理的肝细胞）、，或衣霉素（25μg/ml）+/-3μM环胺48小时。在每次实验中，细胞被分成三份，并取平均值。对2-6个实验的结果进行平均，并绘制平均值±SD结果。第页-使用Student t检验计算值。
图4
图4
NASH的肝活检显示Shh阳性的气球状肝细胞被gli-2阳性的肌成纤维细胞包围。（A） Masson三色染色切片显示膨胀的肝细胞（箭头）被致密纤维基质包围；波形蛋白和α-SMA免疫组化显示基质细胞对这些肌纤维母细胞标记物阳性，并伴有相邻的膨胀肝细胞（箭头所示）；gli-2免疫组化显示肌成纤维细胞核染色阳性，邻近肝细胞肿胀（箭头所示）。（B和C）计算每个活检标本中Shh阳性肝细胞的数量，并将其归一化为活检长度。根据纤维化阶段（B）和球囊扩张程度（C）绘制Shh阳性肝细胞的标准化数量。图表显示了平均值±SD结果（*p<0.05，**p<0.001）。所有图像放大40倍。
图5
图5
生成Hh配体的肝细胞中的Akt激活。从野生型小鼠中分离出原代肝细胞，并在12.5μg/ml或25μg/ml衣霉素或载体对照（DMSO）存在下培养1、6或24小时。（A） p-Akt、Akt和lamin的代表性蛋白质印迹分析（负荷控制）。（B） p-Akt-western blots结果的累积密度分析（按lamin表达标准化）显示为平均值±SD。（C） 在25μg/ml的霉素中孵育后，通过CCK-8测定细胞数。在每次实验中，细胞被分成三份。将两个实验的结果取平均值，并绘制平均值±SD结果图。（*p<0.05，24小时与1小时处理的细胞）。（D） HepG2细胞是一种显示Ihh基本表达的肝细胞系，用含有显性Akt（dnAkt；感染多重性25）或GFP（感染多重性二十五）的腺病毒感染24小时（以抑制Akt）。48小时后采集细胞，对Ihh进行实时定量PCR。图中是一个具有代表性的实验；结果重复了四次。将结果归一化为GFP，并绘制为三份平板的平均值±S.D。（**p=0.003）
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

查看所有“被引用”文章

工具书类

    1. Angulo P.非酒精性脂肪肝。《新英格兰医学杂志》，2002年；346:1221–1231.-公共医学
    1. 卡普尔A，三亚AJ。内质网应激和未折叠蛋白反应。临床肝病。2009;13:581–590.-公共医学
    1. Puri P、Mirshahi F、Cheung O等。非酒精性脂肪性肝病中未折叠蛋白反应的激活和失调。胃肠病学。2008;134:568–576.-公共医学
    1. Strnad P、Zatloukal K、Stumptner C等。Mallory-Denk-bodys:从含角蛋白肝包涵体中吸取的教训。Biochim生物物理学报。2008;1782:764–774.-公共医学
    1. Omary MB，Ku NO，Strnad P等。探索人类疾病中简单上皮角蛋白的复杂性。临床投资杂志。2009;119:1794–1805.-项目管理咨询公司-公共医学

出版物类型

MeSH术语