跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https公司

该站点是安全的。
这个https：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2010年7月；1（3）：198-209年。
doi:10.18632/oncataget.100710。

Src激活Abl以增加Robo1表达，从而促进肿瘤细胞迁移

P Raaj Khusial先生 1, 巴斯卡尔·瓦德拉, 哈里尼·克里希南, Trudy F Ramlall公司, 沈永泉, 一川仁, 建国庚, 加里·斯戈德伯格
附属公司

Src激活Abl以增加Robo1表达，从而促进肿瘤细胞迁移

P Raaj Khusial先生等。 肿瘤靶点. 2010年7月.

摘要

细胞迁移是肿瘤侵袭和转移的关键步骤。许多涉及酪氨酸激酶和信号受体的协调细胞事件使癌细胞从原发性肿瘤中移出并在体内其他地方定居。例如，激活Src和Abl激酶可以介导促进肿瘤细胞迁移的事件。此外，Robo1受体的激活可以诱导肿瘤细胞迁移。然而，虽然Src、Abl和Robo1在细胞迁移中的重要性已被证明，但它们共同影响细胞迁移的分子机制尚未明确阐明。此外，对控制Robo1表达的机制知之甚少。我们在此报告，Src激活Abl以稳定Robo1，从而促进细胞迁移。siRNA或激酶阻滞剂抑制Abl激酶活性可降低Robo1蛋白水平，并抑制转化细胞的迁移。我们还提供证据表明，Robo1利用Cdc42和Rac1 GTPases诱导细胞迁移。此外，在Src和Abl激酶活性较强的情况下，抑制Robo1信号可以抑制转化细胞的迁移。因此，Src、Abl、Robo1和小GTPase抑制剂可能会靶向肿瘤细胞迁移所需的协调途径。

PubMed免责声明

利益冲突声明

提交人声明他们没有利益冲突。

数字

图1：
图1:。Src降低Robo1 mRNA水平，但增加Robo1蛋白水平。
（a）从未转化和Src转化的Cx43Ko细胞中提取mRNA，并通过微阵列分析进行检测。Affymetrix探针组的表达值表示Slit2和Robo1（平均值+SEM，n=2）。（b）通过qRT-PCR分析从野生型胚胎（WT）或纯合性缺失Cx43敲除胚胎（Cx43Ko）获得的未转化细胞和Src转化细胞纯化的RNA，检测Robo1 mRNA的表达。数据显示为未转化细胞的百分比（平均值+扫描电镜，n=2）。（c）Western blotting用于比较非转化细胞和转化细胞中Robo1、总Src、活性Src，Cx43、Slit2和β-actin的表达。通过Western blot分析非转化细胞和Src转化细胞定量Robo1蛋白表达，并显示为非转化细胞的百分比（平均值+SEM，n=3）。一个和三个星号分别表示p值小于0.5和0.005（通过t检验）。
图2：
图2:。Src稳定定位于质膜的Robo1蛋白。
（a）通过Western blotting分析来自环己酰胺处理的非转化细胞、Src转化细胞和经Abl激酶阻断剂GNF-2处理的Src转换细胞的蛋白质，以评估Src和Abl对Robo1蛋白稳定性的影响。数据显示为环己酰胺处理24小时后与未处理对照组相比Robo1蛋白的百分比（平均值+扫描电镜，n=2）。（b）免疫荧光显微镜用于显示Src转化细胞中的Robo1（绿色）和细胞核（蓝色）。DIC图像和合并图像也如图所示（bar=20微米）。（c） 通过荧光显微镜在未转化细胞、Src转化细胞和经GNF-2处理的Src转换细胞中观察到GFP标记的Robo1。DIC图像也如图所示（bar=20微米）。双星号表示与对照组相比p值小于0.01（通过t检验）。
图3：
图3:。Src利用Robo1促进细胞迁移。
将从野生型（WT）或纯合无Cx43基因敲除（Cx43Ko）小鼠胚胎中获得的细胞转染v-Src或空的亲本载体，并在标准或超低附着培养皿上电镀（10000个/孔），以评估（a）锚固和（b）非锚定细胞生长。对于锚定的细胞，在指定的时间点或对于非锚定的细胞，在7天通过库尔特计数器测定细胞数。数据显示为所示时间点每孔的细胞数（平均值+扫描电镜，n=3）。（c）通过对非转化细胞和经IgG对照抗血清、R5抗血清阻断Robo1活性或GNF-2 Abl激酶阻滞剂处理的Src转化细胞进行伤口愈合试验来检测细胞迁移。通过24小时内进入1.8 mm2伤口区域的细胞数量来量化迁移（平均值+扫描电镜，n=5）。（d）用R5抗体或对照抗血清处理Src转化细胞，并通过Western blotting分析Robo1、活性N-WASP（p-N-WASP）或β-actin。然后对N-WASP活性进行量化，并显示为未经处理的对照细胞的百分比（平均值+SEM，N=2）。使用Cx43Ko和WT细胞进行实验，Cx43Ko细胞的结果显示在面板d中。与对照组相比，两个和三个星号表示p值分别小于0.01和0.005（通过t检验）。
图4：
图4:。Src结合并激活转化细胞中的Abl。
（a）Western blotting用于比较非转化和Src转化的Cx43Ko或野生型（WT）细胞中Abl、活性Abl和β-actin的表达。Abl激酶活性被量化，并显示为未转化细胞的百分比（平均值+扫描电镜，n=2）。（b）用抗-Abl或抗-Robo1抗体免疫沉淀来自未转化和Src转化细胞的蛋白质，并用Robo1、Abl或磷酸酪氨酸特异性抗血清进行Western blotting分析，如图所示。三个星号表示与对照组相比p值小于0.005（通过t检验）。
图5：
图5:。Src激活Abl以增加Robo1蛋白水平。
（a）用抗Abl的siRNA转染Src转化的Cx43Ko细胞，或用Abl激酶阻滞剂GNF-2处理，并通过Western blotting分析所示的Abl、active-Abl、Robo1、active-Src、elF4e和β-actin。（b）然后对Abl表达、Abl活性和Robo1表达进行量化，并显示为对照细胞的百分比（平均值+扫描电镜，n=2）。一个星号和三个星号分别表示p值小于0.5和0.005（通过t检验）。
图6：
图6：
说明Src如何激活Abl以稳定Robo1表达以促进细胞迁移的示意图。该途径可被靶向Abl生成（siRNA）、Abl活性（GNF-2）或Robo1激活（R5 Ab）的试剂抑制。
图7：
图7:。Src激活Abl以促进Robo1的表达和人类间皮瘤细胞的迁移。
（a）Western blotting用于比较经R5抗血清阻断Robo1活性或GNF-2 Abl激酶阻滞剂处理的NCIH28间皮瘤细胞中活性Abl、Robo1和β-actin的表达。Abl激酶活性和Robo1水平被量化，并显示为未转化细胞的百分比（平均值+扫描电镜，n=2）。（b）如图所示，用GNF-2或R5抗体处理的NCIH28细胞和对照细胞，通过伤口愈合试验检测细胞迁移。迁移被量化为进入1.8 mm的细胞数量224小时内的伤口面积（平均值+扫描电镜，n=5）。两个和三个星号分别表示p值小于0.01和0.005（通过t检验）。
图8：
图8:。Robo1信号激活转化细胞中的Rho GTPases。
用R5抗体或对照抗血清（IgG）处理Src转化的细胞，并检测总的和激活的Cdc42和Rac1 GTPase面板a和b分别是。采用Western blotting检测活性（GTP结合）Cdc42和Rac1、总Cdc42、Rac1和GST。活性Cdc42和Rac1的水平被量化，并显示为未经处理的对照细胞的百分比（平均值+扫描电镜，n=3）。用Cx43Ko细胞和野生型细胞进行实验，并显示Cx43Ko细胞的结果。一个星号和三个星号分别表示p值小于0.5和0.005（通过t检验）。
请参阅PMC中的此图像和版权信息

中的注释

  • Src和Abl劫持了Robo1路径。
    Naus C.公司。 Naus C.公司。 Oncotarget公司。2010年7月；1(3):167. doi:10.18632/oncataget.100707。 Oncotarget公司。2010 PMID：21301047 免费PMC文章。 没有可用的摘要。

类似文章

查看所有类似文章

引用人

查看所有“被引用”文章

参考文献

    1. Weigelt B.，Peterse J.L.，t Veer L.J.乳腺癌转移：标记物和模型。国家税务总局。2005;5:591–602.-公共医学
    1. Plattner R.、Kadlec L.、DeMali K.A.、Kazlauskas A.、Pendergast A.M.c-Abl被生长因子和Src家族激酶激活，并在细胞对PDGF的反应中发挥作用。基因开发1999；13:2400–2411.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Srinivasan D.，Plattner R.激活Abl酪氨酸激酶促进侵袭性乳腺癌细胞的侵袭。2006年癌症研究；66:5648–5655.-公共医学
    1. Goldberg G.S.、Alexander D.B.、Pellicena P.、Zhang Z.Y.、Tsuda H.、Miller W.T.Src磷酸化酪氨酸253上的Cas，以促进转化细胞的迁移。生物化学杂志。2003;278:46533–46540。-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Yeatman T.J.SRC的复兴。自然收入癌症。2004;4:470–480.-公共医学

出版物类型

MeSH术语