跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府网站。

Https系统

该站点是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2010年7月15日；185(2):1205-14.
doi:10.0409/jimmunol.100039。 Epub 2010年6月11日。

半乳糖凝集素-3缺乏小鼠变应原诱导的气道重塑受损

小娜戈 1, Nooshin S Bahaie公司, 比特·纳康, M Reza Hosseinkhani先生, 宋吉哈, 伊丽莎白·M·弗伦泽尔, 刘福通, 萨维塔·拉奥, P Sriramarao先生
附属公司

半乳糖凝集素-3缺乏小鼠变应原诱导的气道重塑受损

小娜戈等。 免疫学杂志. .

摘要

在慢性过敏性气道炎症小鼠模型中研究了β-半乳糖苷结合凝集素半乳糖凝集素-3（Gal-3）在气道重塑中的作用，气道重塑是哮喘的一个特征，会导致人类气道功能障碍和不良临床结果。野生型（WT）和Gal-3基因敲除（KO）小鼠在12周内接受OVA反复过敏原激发，并评估最后一次激发后收集的支气管肺泡灌洗液（BALF）和肺组织中与气道重塑相关的细胞特征。与WT小鼠相比，Gal-3 KO小鼠的慢性OVA攻击导致气道重塑减少，粘液分泌、上皮下纤维化、平滑肌厚度和支气管周围血管生成显著减少。WT小鼠气道重塑程度越高，BALF和肺组织中Gal-3表达越高。BALF和肺免疫组织学的细胞计数表明，与WT小鼠相比，OVA激发的Gal-3KO小鼠的嗜酸性粒细胞浸润显著减少。对与嗜酸性粒细胞募集和气道重塑相关的细胞介质的评估表明，Gal-3KO小鼠炎症区1中发现的eotaxin-1、IL-5、IL-13和TGF-β的水平显著降低。最后，与WT细胞相比，Gal-3 KO小鼠的白细胞在血管内皮粘附分子上的转运（滚动）减少。总的来说，这些研究表明，Gal-3是一种重要的凝集素，可通过炎症细胞（尤其是嗜酸性粒细胞）的气道募集、Th2表型的形成以及嗜酸性粒分子特异性趋化因子、促纤维生成和血管生成介质的表达增加，促进气道重塑。

PubMed免责声明

数字

图1
图1。慢性气道过敏性炎症期间Gal-3表达上调
使用兔抗人Gal-3抗体进行Western blot分析，测定来自对照组（PBS暴露）和OVA激发的WT小鼠BALF（A）和总肺组织裂解物（B）中Gal-3的水平。用HRP偶联的抗小鼠β-肌动蛋白探针检测肺组织裂解物的斑点，以监测β-肌动蛋白的表达水平作为内部对照。在X射线胶片上显示条带，使用ImageJ进行扫描和分析，以量化条带的密度（像素）。结果（平均值±SE）在肺裂解物中β-肌动蛋白表达正常化（n=4只小鼠/组）。（A）和（B）中的插图显示，Gal-3分别在BALF和来自代表性对照组和OVA激发小鼠的肺裂解物中表达*与WT对照小鼠相比，p<0.05。如材料和方法所述，使用兔抗人Gal-3抗体对对照组和OVA攻击小鼠的肺切片进行免疫组织化学染色。每组放大倍数为×200的代表性图像如图（C）所示。
图2
图2。Gal-3KO小鼠对慢性过敏原激发的气道细胞浸润受到抑制
在最后一次激发24小时后，收集自对照组和OVA激发的Gal-3 KO和WT小鼠的BALF，通过细胞离心切片显微镜评估细胞总数和差异细胞数（对照组为8，OVA激发组为9），并表示为细胞数的平均值±SE×104（A） ●●●●。通过H&E染色对对照组和变应原感染小鼠的副甲醛固定肺组织切片进行肺组织细胞浸润评估。每组放大倍数为×200的代表性图像如图（B）所示。用抗小鼠MBP的大鼠单克隆抗体对嗜酸细胞特异性MBP肺切片进行免疫组织化学染色，以评估肺组织嗜酸细胞。对五个随机选择的非重叠显微镜视野中的MBP阳性细胞进行计数（放大倍数×400），结果表示为每视野（n=9只小鼠/组）的平均细胞数（平均值±SE）（C）*与WT OVA小鼠相比，p<0.05。
图3
图3。气道中招募嗜酸性粒细胞以应对过敏原激发表达Gal-3
将来自OVA激发的WT小鼠的BALF细胞用抗鼠MBP和兔抗人Gal-3抗体的大鼠mAb双重染色，然后用FITC缀合的山羊抗大鼠IgG和罗丹明红-X缀合的山羊抗兔IgG来检测结合的一级抗体。通过共聚焦显微镜（放大倍数×600）对细胞进行评估。箭头表示MBP和Gal-3（a）阳性的代表性区域中的细胞。用从兔抗Gal-3血清中纯化的总IgG作为一级抗体，经Fc阻断抗体处理后，用流式细胞仪分析来自WT OVA攻击小鼠的BALF细胞（非渗透性）表面Gal-3的表达。用兔IgG作为对照。使用PE缀合的山羊抗兔IgG作为第二抗体。对照IgG（左）和抗Gal-3抗体（右）的侧散射曲线如图（B）所示。
图4
图4。Gal-3KO小鼠肺部Th2细胞因子水平下调，以应对慢性过敏原挑战
采用CBA测定对照组和慢性变应原致敏WT和Gal-3KO小鼠（n=5-8/组）肺裂解液中关键Th1（IL-2和IFN-γ）和Th2（IL-4、IL-5和IL-13）细胞因子水平。结果表示为每种细胞因子pg/mg蛋白的平均±SE*与WT PBS小鼠相比，p<0.05**与WT OVA相比p＜0.05。
图5
图5。过敏原激发的Gal-3 KO小鼠表现出eotaxin-1水平下降
用ELISA法测定对照组和OVA激发的WT和Gal-3KO小鼠（n=7-9/组）BALF中Eotaxin-1的水平。根据生成的标准曲线（范围7.8至250 pg/ml）测定BALF中eotaxin-1的浓度，并表示为BALF的pg/ml（平均值±SE）（a）。通过使用鼠抗小鼠Eotaxin-1单克隆抗体进行免疫染色，评估对照组和OVA慢性激发的WT和Gal-3KO小鼠肺组织中Eotaxin-1的表达。每组放大倍数为×100的代表性图像如图（B）所示。qPCR检测对照组和OVA攻击的WT和Gal-3KO小鼠（n=7/组）肺组织中eotaxin-1 mRNA的表达。结果表示为褶皱变化的平均值±SE（2-ΔΔCT)减去内部β-肌动蛋白对照（C）后，eotaxin-1表达减少*与WT OVA小鼠相比，p<0.05。
图6
图6。过敏原诱导的Gal-3KO小鼠气道重塑减弱
通过肺切片PAS染色定量分析对照组和慢性变应原致敏的WT和Gal-3KO小鼠（n=6只小鼠/组）气道中的粘液分泌。PAS阳性杯状细胞的数量表示为每个气道上皮细胞总数的百分比（平均值±SE）（a）。通过使用Masson三色染色法对肺切片进行染色来评估支气管周围纤维化，使用图像J通过图像分析进行量化，并表示为纤维化面积（µm2)/µm基底膜长度（BML）（B）。肺切片中平滑肌层的厚度通过SMA免疫组织化学染色定量，并表示为SMA阳性面积（µm2)/毫米BML（C）。每个案例中的插图显示了OVA激发的WT（左）和Gal-KO（右）小鼠放大×200倍的典型图像*与WT OVA小鼠相比，p＜0.05。
图7
图7。变应原致敏的Gal-3 KO小鼠TGF-β1表达降低
用抗TGF-β1的多克隆抗体通过免疫组织化学检测对照和OVA攻击的WT小鼠和Gal-3 KO小鼠（n=6/组）肺组织中TGF-β1的表达。图中显示了每组放大倍数为×100的代表性图像（a）。成熟TGF-β1（25 kD）的表达水平在β-actin表达正常化后，通过对来自对照组和OVA激发的WT和Gal-3 KO小鼠（n=4/组）的肺组织裂解物的Western blot的密度分析进行定量，并表示为平均值±SE（B）*与WT OVA小鼠相比，p<0.05。
图8
图8。过敏原诱导的Gal-3KO小鼠血管生成受到抑制
使用针对小鼠FIZZ1的山羊多克隆抗体通过免疫组织化学评估对照和OVA攻击的WT和Gal-3 KO小鼠（n=6/组）的肺组织中FIZZ1的表达。使用图像J通过图像分析定量气道FIZZ1的表达，并表示为FIZZ1-阳性区域（µm2)/使用CD31抗体对肺切片进行免疫组织化学染色，评估100µm BML（A）支气管周围血管生成。对气道周围区域（150µm）直径小于15µm的血管数量进行量化，并表示为每条气道的血管数量（B）。数据表示平均值±SE。插图显示了OVA激发的WT（左）和Gal-KO（右）小鼠放大×200倍后的典型图像*与WT OVA小鼠相比，p<0.05。
图9
图9。Gal-3KO小鼠的骨髓白细胞对内皮粘附分子的滚动减少
用兔抗Gal-3血清（10µg/ml）纯化的总IgG作为第一抗体，经Fc阻断抗体治疗后，通过流式细胞术分析WT和Gal-3 KO小鼠的骨髓白细胞（非渗透性）的表面Gal-3表达。使用PE-结合山羊抗兔IgG（10µg/ml）作为二级抗体。WT（左）和Gal-3 KO（右）小鼠骨髓白细胞的侧面散射图如图所示（A）。将来自WT和Gal-3 KO小鼠的骨髓白细胞单细胞悬液输注到含有覆盖有rmGal-3或rmVCAM-1的盖片的流动室中，流速为1 ml/min，持续5分钟。ICAM-1作为阴性对照。在一些实验中，骨髓白细胞在输注前与浓度为3 mM的乳糖或麦芽糖（作为对照）预先孵育。结果表示为每分钟滚动细胞数（平均值±SE）（B）*与在rmGal-3上滚动未经处理的WT-BM细胞相比，p<0.01**与在rmVCAM-1上滚动未经处理的WT-BM细胞相比，p<0.01；#与在rmGal-3上滚动未经处理的WT-BM细胞相比，p<0.01；##与在rmVCAM-1上滚动未经处理的WT-BM细胞相比，p<0.05。
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

查看所有“被引用”文章

工具书类

    1. Bergeron C，Al-Ramli W，Hamid Q.哮喘中的重塑。2009年《美国胸科学会学报》；6:301–305.-公共医学
    1. Tagaya E，Tamaoki J.哮喘中气道重塑的机制。Allergol国际2007；56:331–340.-公共医学
    1. Mehrotra AK、Henderson WR.、。，白三烯在气道重塑中的作用。2009年《现代分子医学》；9:383–391.-公共医学
    1. Doherty T，Broide D.细胞因子和生长因子在哮喘气道重塑中的作用。免疫学的当前观点。2007;19:676–680。-公共医学
    1. 佐藤S，休斯RC。调节巨噬细胞半乳糖苷结合蛋白Mac-2的分泌和表面表达。生物化学杂志。1994;269:4424–4430.-公共医学

出版物类型

MeSH术语

LinkOut-更多资源