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.2010年6月；84(12):5848-59.
doi:10.1128/JVI.00307-10。 Epub 2010年3月31日。

Rab11通路是甲型流感病毒出芽和丝状体形成所必需的

艾米莉·布鲁斯 1, 保罗·迪加德, 阿曼达·D·斯图亚特
附属公司

Rab11通路是甲型流感病毒出芽和丝状体形成所必需的

艾米莉·布鲁斯等。 J维罗尔. 2010年6月.

摘要

流感病毒一种病毒通过顶端质膜发芽，形成被包裹的病毒颗粒，可以形成多形球体或极长的细丝形状。对于这两种病毒，负责病毒和细胞膜分离的因素尚不清楚。我们发现，细胞Rab11（一种参与内吞再循环的小GTP结合蛋白）和Rab11家族相互作用蛋白3（[FIP3]，在膜转运和肌动蛋白动力学调节中发挥作用）都需要支持丝状病毒的形成，而Rab11还参与了球形粒子的最终萌芽阶段。转染Rab11 GTP循环突变体或通过小干扰RNA处理耗尽Rab11或FIP3含量的细胞失去形成病毒丝的能力。Rab11的耗尽导致细胞释放的球形病毒滴度降低100倍。Rab11缺失细胞的扫描电子显微镜显示，在出芽过程中，高密度的病毒颗粒明显停滞。薄片的透射电子显微镜证实，Rab11的缺失导致大量异常形成的病毒颗粒未能从质膜上脱落。基于这些发现，我们发现Rab11介导的途径在流感病毒形态发生和萌芽中具有明确的作用。

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图1。
图1。
过度表达GFP标记的Rab多肽对流感病毒丝形成的影响。用表达所示GFP标记多肽的质粒转染（或模拟转染）CaCo2细胞，并在感染PR8 MUd 10倍感染前培养过夜。细胞于16h p.i.固定，细胞表面HA（被抗PR8血清染成红色）和GFP（绿色）通过共焦显微镜成像。（a） 代表z（z）-显示了平面重建。比例尺，5μm。（b） 对来自两个独立实验的至少200个细胞进行丝状突起存在与否的评分。绘制平均值和范围。
图2。
图2。
siRNA处理的细胞中的细胞和病毒蛋白积累。用靶向所示细胞多肽的siRNA序列转染（或模拟转染）293T细胞。在转染后72小时，细胞被PR8病毒感染（或模拟感染，如有指示），感染倍数为5，持续24小时，然后进行进一步分析。（a和c）通过Western blotting对细胞进行裂解并分析所示蛋白。（b） 通过密度测定法量化所示蛋白质的水平，将其归一化为微管蛋白水平，并绘制为用非靶向对照或无RNA处理的细胞中平均含量的百分比。平均值和标准偏差（Rab11a，n个= 16; Rab 11b和FIP3，n个= 4; NP、，n个=4）。请注意，面板c上部印迹中使用的凝胶条件没有溶解PB1和PB1-N40（PB1的N末端截断变体）（56）。
图3。
图3。
siRNA处理细胞中流感病毒丝的形成。293T细胞转染靶向指示蛋白的siRNA序列或非靶向对照（a和d）。在转染后72 h，用PR8 MUd感染（或模拟感染）细胞，感染倍数为5，固定在16 h p.i.，并用荧光标记的WGA染色以显示细胞表面（红色）以及用抗NP血清染色以验证感染（绿色）。图像是共焦的最大强度投影z（z）-以大约0.5-μm的步长通过电池的堆叠。
图4。
图4。
Rab11-或FIP3-缺失（−）细胞中纤维形成的SEM分析。用靶向Rab11a和Rab11b（d至f）、FIP3（g至i）或非靶向对照（a至c）的siRNA序列转染293T细胞，并在转染后72小时以5倍感染率感染PR8 MUd。在p.i.第16小时，固定细胞并进行SEM成像处理。
图5：。
图5：。
FIP3缺失细胞中病毒出芽的TEM分析。用非靶向siRNA序列（a和b）或针对FIP3（c）的siRNA转染293T细胞，并在转染后72小时以5倍感染率感染或模拟感染PR8 MUd标记的细胞。在16小时p.i.时，将细胞固定并处理以进行TEM成像。比例尺，500 nm。箭头表示球形病毒颗粒；箭头表示通过纤丝束的横截面。
图6。
图6。
病毒在siRNA处理的细胞中的复制。用靶向所示细胞多肽的siRNA序列转染（或模拟转染）293T或A549细胞。转染后72小时，细胞感染PR8病毒（甲型流感病毒[IAV]），感染倍数为5，或感染倍数为10。感染细胞的上清液于24h p.i.采集，并通过菌斑试验测定滴度。从未转染细胞和用非靶向siRNAs处理的细胞获得的滴度被平均并定义为100%。平均误差和标准误差（IAV感染的293T细胞，n个≥4个重复实验；IAV感染的A549细胞，n个≥3; HSV感染293T细胞，n个=2）。
图7。
图7。
Rab11和流感病毒NP的克隆化。（a）293T细胞被模拟感染或感染，感染倍数为5，固定在6 h p.i.，并染色Rab11（绿色）、NP（红色）和DNA（蓝色）。（b和c）用编码GFP标记的CA或DN Rab11蛋白的质粒转染细胞，转染后18 h感染，并在6 h p.i.对NP和DNA进行染色。显示了单个光学切片。比例尺，4μm。
图8。
图8。
Rab11或FIP3缺失细胞中的NP和HA定位。用靶向Rab11a和Rab11b、FIP3或指示的非靶向对照的siRNA序列转染293T细胞，并在转染后72小时以5倍感染率感染（或模拟感染）PR8。（a） 在6和20小时p.i.细胞被固定并渗透，然后进行NP染色。显示了单个光学切片。每个面板代表一个150 x 135微米的窗口。（b） 在p.i.第16小时，细胞被固定并进行HA染色。显示了一组光学截面通过细胞上半部的最大强度投影。比例尺，10μm。
图9：。
图9：。
病毒在Rab11缺失的细胞中出芽的SEM可视化。用靶向Rab11a和Rab11b（b和d）或非靶向对照（a和c）的siRNA序列转染293T细胞，并在转染后72小时模拟感染或感染PR8，感染倍数为5。p.i.第16小时，在处理2μm的SEM比例尺之前，将细胞清洗并固定在盖玻片上过夜。
图10。
图10。
Rab11缺失细胞中出芽病毒的TEM可视化。用靶向Rab11a（b）、Rab11a和Rab11b（d和f）或非靶向对照（a、c和e）的siRNA序列转染293T细胞，并在转染后72小时模拟感染（e）或感染PR8，感染倍数为5。在p.i.第16小时，将细胞固定并进行TEM处理。比例尺，100 nm。
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    1. Bourmakina，S.V.和A.Garcia Sastre。2003.甲型流感病毒丝状形态的反向遗传学研究。《病毒遗传学杂志》。84:517-527.-公共医学
    1. Brock，S.C.、J.R.Golderning和J.E.Crowe，Jr.2003年。顶端循环系统调节呼吸道合胞病毒从极化上皮细胞定向萌发。程序。国家。阿卡德。科学。美国100:15143-15148。-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Bruce，E.A.、L.Medcalf、C.M.Crump、S.L.Noton、A.D.Stuart、H.M.Wise、D.Elton、K.Bowers和P.Digard。2009年。丝状和非丝状流感A病毒通过VPS4和VPS28非依赖性途径萌芽。病毒学390:268-278。-公共医学

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