Proteomic analysis of brush-border membrane vesicles isolated from purified proximal convoluted tubules

doi:10.1152/ajprenal.00711.2009

比较研究

.2010年6月；298（6）：F1323-31。

doi:10.1152/ajprenal.00711.2009。 Epub 2010年3月10日。

纯化近曲小管刷状缘膜泡的蛋白质组学分析

斯科特·沃尔姆斯利¹, 科里·布勒克林, 安·赫斯, 杰西卡·普伦尼, 诺曼·P·柯特霍斯

附属公司

PMID： 20219825
预防性维修识别码：项目经理2886813
内政部： 10.1152/ajprenal.00711.2009

比较研究

纯化近曲小管刷状缘膜泡的蛋白质组学分析

斯科特·沃尔姆斯利等。美国生理学杂志肾生理学. 2010年6月.

.2010年6月；298（6）：F1323-31。

doi:10.1152/ajprenal.00711.2009。 Epub 2010年3月10日。

作者

斯科特·沃尔姆斯利¹, 科里·布勒克林, 安·赫斯, 杰西卡·普伦尼, 诺曼·P·柯特霍斯

附属

¹科罗拉多州立大学细胞和分子生物学项目，美国科罗拉多州柯林斯堡80523-1870。

PMID： 20219825
预防性维修识别码：项目经理2886813
内政部： 10.1152/ajprenal.00711.2009

摘要

肾近曲小管是水、电解质和营养物质重吸收的主要部位，也是某些分子分泌的主要场所。顶端刷状缘膜中的蛋白质促进这些功能，并启动一些细胞对肾脏生理改变的反应。目前的研究使用二维液相色谱/质谱法来比较从大鼠肾皮质（BBMV（CTX））和纯化的近曲小管（BBMV（PCT））分离的刷状边界膜囊泡。蛋白质组数据和Western blot分析均表明，BBMV（CTX）含有来自皮质细胞而非近端小管的顶膜蛋白。这种异质性在BBMV（PCT）中大大降低。蛋白质组学分析确定了193个两种样品共有的蛋白质，21个BBMV（CTX）特有的蛋白质，57个BBMV（PCT）特有的蛋白。光谱计数用于量化蛋白质丰度的相对差异。该分析确定了分别在BBMV（CTX）和BBMV中显著富集的42和50个蛋白质（p值<或=0.001）。这些数据通过γ-谷氨酰转肽酶活性测量和Western blot分析进行验证。综合结果表明，BBMV（PCT）主要来源于近曲小管（S1和S2段），而BBMV包括近曲直管（S3段）的蛋白质。功能注释分析表明，BBMV（PCT）富含参与葡萄糖和有机酸代谢的线粒体蛋白质和酶。因此，本研究报告了大鼠肾近曲小管刷状缘膜的详细蛋白质组学分析，并为未来假设驱动的研究提供了数据库。

PubMed免责声明

数字

**图1。**
在分离的刷状边界膜泡（BBMV）中富集γ-谷氨酰转肽酶（γ-GT）活性。大鼠肾皮质和皮质和近曲小管中分离的BBMV（BBMV）的粗匀浆_CTX公司和BBMV_百分比分别测定γ-GT活性和蛋白质。针对3个单独的样品，将比活度的折叠增加绘制为条形图±SD。

**图2。**
BBMV纯度的Western blot分析_CTX公司和BBMV_百分比.A类：污染细胞器和基底外侧膜的分析。含有20μg大鼠肾皮质和BBMV粗匀浆的样品_CTX公司用SDS-PAGE分离，并用顶端（BBM）Na特异性抗体进行检测⁺/H（H）⁺交换素-3（NHE3）、基底外侧（BLM）葡萄糖转运蛋白（GLUT2）、线粒体（MITO）琥珀酸脱氢酶（SDH）和内质网（ER）标记物钙连蛋白（CNX）。B类：分析污染的根尖膜。含有20μg肾皮质和BBMV的样品_CTX公司或隔离BBMV_百分比在大脑皮层中，只在近端小管（PT）、Na中表达的蛋白质⁺/H（H）⁺交换器调节因子-1（NHERF1）；厚上升翼（TAL），Na⁺K（K）⁺2毫升⁻-共同转运蛋白-2（NKCC2）；远端小管（DT），噻嗪敏感钠⁺氯⁻共转运体（TSC）；收集管（CD）、水通道蛋白-2（AQP2）。对于每种蛋白质，间距表示从单个凝胶的原始图形中删除了一条泳道的位置。

**图3。**
BBMV的蛋白质组分析_CTX公司和BBMV_百分比.A类：2个BBMV样本中鉴定的总蛋白的维恩图。B类：BBMV中鉴定的251个蛋白质的功能分类_百分比样品。C类：BBMV中鉴定的214个蛋白质的功能分类_CTX公司样品。

**图4。**
与联合BBMV中鉴定的20种最丰富蛋白质相关的总光谱计数（SpC）的比较_百分比和BBMV_CTX公司样品。BBMV中每种蛋白质的SpC测定_百分比和BBMV_CTX公司样品分别用黑色条和灰色条表示。

**图5。**
重复样品中总SpC的散点图。A类：重复注射之间总SpC的相关性。皮尔逊的产品表明第页在重复注射的典型示例之间=0.97。B类：生物复制品之间总SpC的相关性。皮尔逊的产品表明第页=0.94和第页在复制BBMV之间=0.95_CTX公司和BBMV_百分比样本。

**图6。**
BBMV中蛋白质丰度差异的统计分析_CTX公司和BBMV_百分比样品。该分析以对数图表示₂SpC（R）的归一化比率_{联合国安全理事会})与所有已识别蛋白质的总SpC进行比较。绿色和红色圆圈表示BBMV中显著增加的蛋白质_百分比或BBMV_CTX公司样本。黑色圆圈表示两个样本中没有差异的剩余蛋白质。

**图7。**
BBMV中显著富集的蛋白质的功能分类_CTX公司(A类)和BBMV_百分比(B类)样品。

**图8。**
与BBMV中显著富集的蛋白质相关的总SpC的比较_百分比或BBMV_CTX公司样品。BBMV中每种蛋白质的总SpC测定值_百分比和BBMV_CTX公司样本分别由黑条和灰条表示。R_{联合国安全理事会}值是日志₂BBMV中总SpC的标准化比率_百分比至BBMV_CTX公司样品。

**图9。**
BBMV浓缩验证_CTX公司优先表达于近曲小管S3段的蛋白质。A类：肾皮质匀浆和BBMV中氨基酸转运蛋白rBAT和γ-GT的水平_CTX公司和BBMV_百分比样品通过Western blot分析进行评估。B类：BBMV中rBAT和γ-GT的折叠富集_CTX公司至BBMV_百分比根据SpC和Western blot分析（WB）的比值计算样本，并以条形图表示。

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