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.2010年9月；51(9):4371-9.
doi:10.1167/iovs.09-4278。 Epub 2009年10月29日。

典型Wnt通路在年龄相关性黄斑变性中的致病作用

Ti Zhou公司 1, 杨虎, 陈颖（音）, 凯文·K·周, Bin Zhang（张斌）, 高国权, 马建兴
附属公司

典型Wnt通路在年龄相关性黄斑变性中的致病作用

Ti Zhou公司等。 投资眼科视觉科学. 2010年9月.

摘要

目的：作者以前的研究表明，年龄相关性黄斑变性（AMD）和糖尿病视网膜病变（DR）动物模型的视网膜和视网膜色素上皮中Wnt信号通路被激活。本研究旨在探讨经典Wnt通路在这些疾病发病机制中的作用。

方法：使用Wnt3a条件培养基和腺病毒激活Wnt通路，腺病毒在ARPE19（一种源自人类RPE的细胞系）中表达β-连环蛋白（Ad-S37A）的组成活性突变体。将Ad-S37A注射到正常大鼠的玻璃体中以激活视网膜中的Wnt通路。Western blot检测β-catenin的积累，免疫细胞化学检测其核转位。通过Western blot分析和ELISA定量炎症因子。通过测量细胞内活性氧（ROS）生成和硝基酪氨酸水平来确定氧化应激。

结果：Wnt3a条件培养基和Ad-S37A都增加了ARPE19细胞中的β-catenin水平及其核转位，表明典型Wnt途径被激活。Wnt通路的激活显著上调了VEGF、NF-kappaB和TNF-α的表达。此外，Ad-S37A以剂量依赖的方式诱导ROS生成。Wnt3a还诱导活性氧生成量加倍。玻璃体内注射Ad-S37A可上调正常大鼠视网膜中VEGF、ICAM-1、NF-kappaB和TNF-α的表达，并增加蛋白质硝基酪氨酸水平。

结论：典型Wnt通路的激活足以诱导视网膜炎症和氧化应激，并在AMD和DR中起致病作用。

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数字

图1。
图1。
Wnt3a条件培养基升高β-catenin水平并上调炎症因子的表达。(A类)用50%Ctrl-CM或Wnt3a-CM处理ARPE19细胞12小时。通过Western blot分析，使用每个样品50μg总蛋白测定总β-连环蛋白水平。印迹是三个独立实验的代表。(B)通过三个独立实验的密度测定法对总β-连环蛋白进行定量，用β-肌动蛋白水平进行归一化，并用Ctrl-CM处理的细胞中的百分比表示（平均值±SD）*P（P）< 0.05. (C类)用50%Ctrl-CM和Wnt3a-CM处理细胞24小时。通过Western blot分析，使用每个样本50μg总蛋白测定VEGF和TNF-α的细胞水平。(D类,E类)VEGF和TNF-α的表达通过三个独立实验的密度测定法进行量化，用β-肌动蛋白水平进行标准化，并用Ctrl-CM处理的细胞中的百分比表示（平均值±SD）*P（P）< 0.05.
图2。
图2。
β-catenin的组成活性突变体增加了总β-catentin水平及其核转位。将Ad-β-gal或Ad-S37A感染ARPE19细胞48小时。(A类)用His-tag、β-catenin和β-actin抗体依次免疫印迹细胞总蛋白（每个样品50μg）。印迹是三个独立实验的代表。(B)总β-连环蛋白水平通过密度计进行量化，并通过β-肌动蛋白水平进行标准化，并以Ad-β-gal感染的对照细胞的百分比表示（平均值±SD；n个=3）*P（P）< 0.05. (C1类,第1页)使用β-连环蛋白特异性抗体对感染细胞进行免疫染色，以揭示β-连环蛋白的亚细胞定位。(指挥与控制,D2类)β-连环蛋白信号输入(C1类,第1页)与细胞核DAPI染色融合。浅蓝色：D2细胞核中β-catenin和DAPI染色的共定位。(E1级,一层楼)用表达GFP的质粒转染ARPE19细胞(E1级)或S37A与GFP熔合(一层楼). (E2级,地上二层)GFP信号(绿色)英寸E1级和一层楼与DAPI染色合并(蓝色). 图像是三个独立实验的代表。(G公司,H（H）)分离细胞核，并使用50μg核蛋白通过Western blot分析测定核β-连环蛋白水平(G公司)并通过密度测定进行量化，根据组蛋白-3水平进行标准化，并表示为对照组的百分比(H（H）)（平均值±SD；n个= 3). *P（P）< 0.05.
图3。
图3。
β-catenin的组成活性突变体诱导炎症因子过度表达。(A类,C类,E类)用Ad-β-gal和Ad-S37A感染ARPE19细胞48小时。VEGF水平(A类)，肿瘤坏死因子-α(C类)和NF-κB(E类)用每个样品中的50μg总蛋白通过Western blot分析测定细胞中的蛋白质。每个印迹都是三个独立实验的代表。(B,D类,F类)通过密度测定法定量VEGF、TNF-α和NF-κB，用β-肌动蛋白水平进行标准化，并表示为对照组的百分比。(G公司,H（H）)用含有NF-κB结合位点的寡核苷酸沉淀NF-κ的B。用抗NF-κB抗体印迹沉淀蛋白(G公司). 沉淀NF-κB水平通过密度测定法进行量化，并通过沉淀前样品中的β-肌动蛋白水平进行归一化(H（H）). 所有值均为平均值±SD(n个= 3). *P（P）< 0.05.
图4。
图4。
Wnt信号诱导的活性氧生成和蛋白质硝化。(A类,B)在MOI指示的48小时内，ARPE19细胞被Ad-β-gal或Ad-S37A感染(A类)或用50%Ctrl-CM和Wnt3a-CM处理12小时(B). 使用CM-H2DCFDA作为探针测量细胞内ROS生成。数值为平均值±SD(n个= 3). **P（P）与Ad-β-gal感染的细胞相比，P<0.01(C类)3-硝基酪氨酸（3-NT）的水平通过蛋白质印迹分析测定，使用来自每个样品的40μg总蛋白，并通过β-肌动蛋白水平进行归一化。(D类)通过三个独立实验的密度计对硝基酪氨酸进行定量，并以对照细胞中硝基酪氨酸的百分比表示（平均值±标准差）*P（P）< 0.05.
图5。
图5。
β-catenin的组成活性突变体诱导视网膜中的β-catentin积聚。(A类)6周龄正常棕色挪威大鼠接受Ad-β-gal和Ad-S37A（5×10）玻璃体内注射7IFU/眼睛）。注射后两周，解剖视网膜，用每个视网膜50μg总蛋白的Western blot分析测定总β-catenin水平，并用β-actin水平归一化。每条车道代表一种动物。(B)用密度测定法定量β-catenin的表达*P（P）< 0.05. 数值为平均值±SD(n个= 3).
图6。
图6。
β-catenin的组成活性突变体诱导正常视网膜中炎症因子的表达和蛋白质硝化。(A类,C类,E类,G公司)6周龄正常大鼠接受Ad-β-gal和Ad-S37A（5×10）玻璃体内注射7IFU/眼睛）。注射两周后，解剖视网膜和RPE复合体，并使用每个样品50μg总蛋白进行Western blot分析，测定VEGF、TNF-α、NF-κB和3-NT的水平，并用β-肌动蛋白水平进行归一化。每条车道代表一种动物。(B,D类,F类,H（H）)通过密度测定法定量VEGF、TNF-α、NF-κB和3-NT的水平，并以注射对照病毒的眼睛中的百分比表示*P（P）< 0.05. 数值为平均值±SD(n个= 3). (我)使用ELISA试剂盒测量视网膜中的可溶性ICAM-1（sICAM-1）浓度，用总蛋白浓度进行标准化，并用视网膜蛋白的ng/mg表示（平均值±SD；n个= 3).
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    1. 丁X，帕特尔M，陈CC。年龄相关性黄斑变性的分子病理学。Prog Retin眼科研究2009；28:1–18-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Anderson DH、Mullins RF、Hageman GS、Johnson LV。局部炎症在衰老眼睛中形成红肿中的作用。美国眼科杂志。2002;134:411–431-公共医学
    1. Ambati J、Ambati BK、Yoo SH、Ianchulev S、Adamis AP。老年性黄斑变性：病因、发病机制和治疗策略。Surv眼科。2003;48:257–293-公共医学

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