MicroRNA-222 regulates cell invasion by targeting matrix metalloproteinase 1 (MMP1) and manganese superoxide dismutase 2 (SOD2) in tongue squamous cell carcinoma cell lines

.2009年5月-6月；6(3):131-9.

MicroRNA-222通过靶向基质金属蛋白酶1（MMP1）和锰超氧化物歧化酶2（SOD2）调节舌鳞癌细胞系的细胞侵袭

刘西强¹, 余金生, 卢江, 王安勋, 费氏, 慧叶, 周晓峰

附属公司

PMID： 19487542
预防性维修识别码： PMC2890246型

MicroRNA-222通过靶向基质金属蛋白酶1（MMP1）和锰超氧化物歧化酶2（SOD2）调节舌鳞癌细胞系的细胞侵袭

刘西强等。癌症基因组蛋白质组学. 2009年5月-6月.

.2009年5月-6月；6(3):131-9.

作者

刘西强¹, 余金生, 卢江, 王安勋, 费氏, 慧叶, 周晓峰

附属

¹美国伊利诺伊大学芝加哥分校牙科学院口腔疾病分子生物学中心，邮编60612-7213。

PMID： 19487542
预防性维修识别码： PMC2890246型

摘要

微RNA放松调控参与肿瘤的发生和发展。本研究的目的是鉴定和验证有助于口腔舌鳞癌转移的microRNA候选基因。利用微阵列技术，在具有不同转移潜能的成对OTSCC细胞系中鉴定出一组差异表达的microRNA。使用定量PCR方法进一步验证选定的microRNA候选物（包括hsa-miR-222）。功能分析表明hsa-miR-222抑制OTSCC细胞侵袭。异位转染hsa-miR-222可降低OTSCC细胞系中MMP1和SOD2的表达。通过荧光素酶报告基因分析，确认hsa-miR-222直接靶向位于MMP1和SOD2 mRNA的3'非翻译区的特定序列。此外，siRNA敲低SOD2导致MMP1表达下调。综上所述，这些结果表明hsa-miR-222通过直接顺调控机制（靶向MMP1 mRNA）和间接反调控机制（通过靶向SOD2间接控制MMP1基因表达）调节MMP1的表达。我们的结果表明，hsa-miR-222在OTSCC侵袭中起重要作用，并可能成为具有转移性疾病风险的OTSCC患者的新治疗靶点。

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数字

图1
验证微RNA在UM1/UM2细胞系中的差异表达。按照材料和方法部分所述进行qRT-PCR，以评估UM1和UM2细胞系中的hsa-miR-138、hsa-miR155、hsa-miR-205、hsa-miR-221和hsa-miR222。在配对的UM1/UM2细胞系中，所有测试的microRNAs的表达水平均存在统计学上的显著差异（p<0.05）。

图2
miR-222对OTSCC细胞凋亡、细胞周期、侵袭和p27表达的影响。用hsa-miR-222模拟物和阴性对照microRNA模拟物转染UM1细胞。使用未处理的UM2细胞作为对照。如材料和方法部分所述，在这些细胞中测量细胞凋亡（A）、细胞周期（B）、细胞侵袭（C）和p27蛋白水平（D）。数据表示至少3个独立的三重实验，结果相似。

图3
靶向MMP1的miR-222。A） MMP1 3′非翻译区（3′-UTR）预测的hsa-miR-222靶向序列。B）如材料和方法部分所述，使用包含克隆到报告基因（pGL3-MMP1 3′-UTR）的预测靶序列的构建物进行双荧光素酶报告分析。当细胞转染hsa-miR-222模拟物和阴性对照microRNA时，荧光素酶活性的差异具有统计学意义（p<0.05）。C） western blots检测到，当用hsa-miR-222模拟物转染UM1细胞时，MMP1蛋白水平降低。D） Western blot分析证实了UM1细胞中特定siRNA对MMP1表达的有效抑制。E）用MMP1特异性siRNA和对照siRNA处理UM1细胞，检测细胞侵袭性。细胞侵袭性差异具有统计学意义（p<0.05）。数据表示至少3个独立的三重实验，结果相似。

图4
miR-222靶向SOD2。A）在SOD2 3′-非翻译区（3′-UTR）预测的hsa-miR-222靶向序列。B）如材料和方法部分所述，使用包含克隆到报告基因（pGL3-SOD2 3′-UTR）的预测靶序列的构建物进行双荧光素酶报告分析。当细胞转染hsa-miR-222模拟物和阴性对照microRNA时，荧光素酶活性的差异具有统计学意义（p<0.05）。C） western blots检测到，当用hsa-miR-222模拟物转染UM1细胞时，SOD2蛋白水平降低。D） Western blot分析证实了UM1细胞中特定siRNA对SOD2表达的有效抑制。SOD2敲除也降低了MMP1的表达水平。E）用SOD2特异性siRNA和对照siRNA处理UM1细胞，检测细胞侵袭性。细胞侵袭性差异具有统计学意义（p<0.05）。数据表示至少3个独立的三重实验，结果相似。

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