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.2009年2月;20(2):363-79。
doi:10.1681/ASN.2008040406。 Epub 2008年12月3日。

尿外泌体的大规模蛋白质组学和磷酸蛋白质组学

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尿外泌体的大规模蛋白质组学和磷酸蛋白质组学

帕特里夏·A·冈萨雷斯等。 美国肾脏病学会杂志. 2009年2月.

摘要

正常人尿液中含有大量外泌体,这些外泌物是40至100nm的小泡,起源于多小泡体中面向尿腔的每种肾上皮细胞类型的内部小泡。在这里,我们使用LC-MS/MS来分析人类泌尿系外泌体的蛋白质组。总体而言,该分析明确鉴定了1132种蛋白质,其中177种在疾病相关基因的在线孟德尔遗传数据库中有代表性,这表明外泌体分析是发现尿液生物标志物的一种潜在方法。我们使用中性缺失扫描将蛋白质组学分析扩展到磷酸化蛋白质组学分析,这产生了多个新的磷酸化位点,包括噻嗪敏感的Na-Cl共转运蛋白NCC中的丝氨酸-811。为了证明外泌体分析在鉴定遗传性肾脏疾病中的潜在应用,我们对临床诊断为Bartter综合征I型的患者的尿液样本进行了外泌物体免疫印迹,显示没有钠-氯化钾共转运体2,NKCC2。蛋白质组数据可在以下网址公开获取:http://dir.nhlbi.nih.gov/papers/lkem/exosome/。

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数字

图1。
图1。
疾病相关蛋白:NKCC2和Bartter综合征I型。(A)Bartter综合症I型患者、患者1和患者2的临床表型详情。(B) 超声图像显示患者1和2肾脏中的钙沉积(白色箭头)。(C) 使用多克隆兔抗NKCC2和NCC抗体对患者1、患者2、对照1和对照2的尿液外泌体样本进行免疫印迹。
图2。
图2。
NCC中新的磷酸化位点。NCC蛋白上的丝氨酸-811被磷酸化。(A) 肽上的磷酸化位点用星号(*)表示。(B) +2质谱中的中性损失峰(NL)和位置决定离子b5、b6、y7和y8。
图3。
图3。
尿外泌体中AQP2-S256磷酸化的检测。用dDAVP(V)治疗大鼠髓内集合管IMCD2R选择性加压素类似物)30分钟;exo(10μg),是人体泌尿系外泌体,10μg;外泌物(72μg),人尿外泌体,72μg。
图4。
图4。
用于从尿液中分离尿液外泌体的差速离心程序。
图5。
图5。
InsPecT为CHMP1A蛋白(NP_002759)生成的光谱。肽序列为RVYAENAIRK。b离子和y离子的标记区域用黑色实线表示。
图6。
图6。
消除数据集歧义的标准。(A) 当一个肽序列与一个且只有一个蛋白质完全匹配时的明确识别。(B) 当一个肽序列与一个以上的蛋白质100%匹配而没有间隙时,这是一个明确的鉴定,但这些蛋白质是一个独特基因的剪接变体产物。(C) 当一个肽序列与来自一个以上基因的一个以上蛋白质100%匹配且没有间隙时,这是一种模糊的鉴定,并且鉴定仅基于该单个肽。

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引用人

工具书类

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    1. Zhou H、Yuen PS、Pisitkun T、Gonzales PA、Yasuda H、Dear JW、Gross P、Knepper P、Star RA:收集、储存、保存和规范人类泌尿系外泌体,以发现生物标记物。肾脏Int 69:1471–14762006-项目管理咨询公司-公共医学
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