Genome-wide screen of three herpesviruses for protein subcellular localization and alteration of PML nuclear bodies

doi:10.1371/journal.ppat.1000100

.2008年7月11日；4（7）：e1000100。

doi:10.1371/journal.ppat.1000100。

三种疱疹病毒蛋白亚细胞定位和PML核体改变的全基因组筛选

杰米·萨尔斯曼¹, 妮可·齐默尔曼, 陈见飞, 梅根·多马加拉, 洛里·弗拉皮耶

附属公司

PMID： 18617993
预防性维修识别码：下午2438612
内政部： 10.1371/日志.ppat.1000100

三种疱疹病毒蛋白亚细胞定位和PML核体改变的全基因组筛选

杰米·萨尔斯曼等。公共科学图书馆-病理学. 2008.

.2008年7月11日；4（7）：e1000100。

doi:10.1371/journal.ppat.1000100。

作者

杰米·萨尔斯曼¹, 妮可·齐默尔曼, 陈见飞, 梅根·多玛加拉, 洛里·弗拉皮耶

附属

¹加拿大安大略省多伦多市多伦多大学分子遗传学系。

PMID： 18617993
预防性维修识别码：项目经理2438612
内政部： 10.1371/日志.ppat.1000100

摘要

疱疹病毒是一种普遍存在的大型DNA病毒，具有复杂的宿主相互作用，但这些病毒编码的许多蛋白质还没有进行功能表征。作为功能鉴定的第一步，我们确定了来自单纯疱疹病毒、巨细胞病毒和EB病毒的234个表位标记蛋白的亚细胞定位。93个核定位蛋白中有20个形成了亚核结构。其中12个定位于核仁，5个至少部分定位于早幼粒细胞白血病（PML）小体，已知PML小体可抑制病毒溶解感染。此外，有两种蛋白破坏了Cajal小体，其中19种核蛋白显著减少了每个细胞的PML小体数量，其中6种经SUMO修饰。这些结果首次揭示了120多种以前未研究的蛋白质的功能，并表明疱疹病毒利用多种策略操纵控制关键细胞过程的核体。

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利益冲突声明

提交人声明，不存在相互竞争的利益。

数字

**图1。疱疹病毒蛋白在293T细胞中表达的定位综述。**
（A）通过IF检测C-末端FLAG表位确定的转染293T细胞中表达的疱疹病毒蛋白的定位汇总表。活克隆是指通过IF检测到病毒蛋白的克隆数量。（B）代表泛细胞、泛细胞质、亚细胞质、泛核和亚核定位的IF显微照片。比例尺 = 10微米。

**图2。具有亚核定位的疱疹病毒蛋白。**
将转染有指示病毒蛋白表达质粒（绿色）的U2OS细胞固定，并用FLAG抗体染色以观察病毒蛋白。用DAPI染色（蓝色）观察DNA。对于标有星号（*）的蛋白质，在U2OS细胞中观察到亚核结构，但在293T细胞中未观察到，而在U2OS和293T的细胞中均观察到未标记的亚核结构。比例尺 = 10微米。

**图3。与核仁相关的疱疹病毒蛋白。**
表达指示病毒蛋白的U2OS细胞用FLAG抗体染色以检测病毒蛋白（绿色），用EBP2抗体染色以显示核仁（红色）。比例尺 = 10微米。

**图4。疱疹病毒蛋白对PML NBs的影响。**
表达指示病毒蛋白的U2OS细胞用FLAG抗体染色以检测病毒蛋白（绿色），用PML抗体染色以显示PML蛋白（红色）。（A）与PML NB表现出某种程度的共同定位的病毒蛋白。图像也被合并以显示病毒蛋白与PML小体（黄色）的共同定位。（B）未转染对照细胞和破坏PML NB的病毒蛋白的PML染色。比例尺 = 10微米。

**图5。CMV UL3和UL30对Cajal体的破坏。**
（A）表达UL3和UL30的U2OS细胞和未转染的对照细胞用FLAG抗体染色以检测病毒蛋白（绿色）和coilin抗体检测Cajal小体（红色），并用DAPI（蓝色）复染。比例尺 = 10微米。（B）显示按（A）制备的细胞中每个细胞Cajal小体平均数量的直方图。显示了5个单独实验的平均值±SE。（C）绘制（B）中样本的数据，以显示每个细胞具有给定数量Cajal小体的细胞百分比。显示了3个单独实验的平均值±SE。

**图6。定量PML破坏和检测导致PML破坏的SUMO化病毒蛋白。**
（A）直方图显示每种所示病毒蛋白的每个转染U2OS细胞中PML小体的平均数量。数据以平均值±SE（n = 3–8). （B）将所示病毒蛋白和myc标记的SUMO-1共同转染U2OS细胞，然后对FLAG（顶部面板）或SUMO（底部面板）进行抗FLAG免疫沉淀（IP）和Western blotting（WB）。BFLF2的SUMO-blot通道来自相同的印迹，暴露时间为剩余通道的1/3，以解析单个SUMOylated蛋白形式。箭头表示未修饰病毒蛋白的预测分子量。用星号（*）标记的条带表示在病毒蛋白免疫印迹中明显的病毒蛋白的高分子量形式，并且在SUMO印迹中显示含有SUMO。

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