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.2008年6月30日;171(2):233-8.
doi:10.1016/j.pneumeth.2008.03.012。 Epub 2008年3月30日。

Huntingtin三重重复序列基因座在人类细胞长期Fen1敲除下是稳定的

附属公司

Huntingtin三重重复序列基因座在人类细胞长期Fen1敲除下是稳定的

斯文·埃里克·莫伊等。 神经科学方法杂志. .

摘要

Fen1损失对三核苷酸重复扩增的影响因物种而异。在酵母中,Fen1同源物Rad27的缺失或单倍体不足会导致三倍体扩增。在小鼠中,Fen1的单倍体不足导致亨廷顿基因CAG重复序列的扩增。然而,没有观察到(CTG)(n)的扩张。(CAG)(n)重复序列。相反,在果蝇中,SCA7 CAG90重复序列在一系列DNA修复基因突变的菌株中完全稳定,其中包括PCNA、MutS和Fen1。鉴于三重态扩展的明显物种依赖性,我们在人类细胞中研究了Fen1缺失对Huntingtin CAG重复序列的影响。我们构建了一个细胞系Fen-Rex,它可以通过RNA干扰(RNAi)以可逆的方式调节内源性Fen1的表达。保持Fen1蛋白在27次连续细胞传代中被敲除10倍(总共10(17)倍),并通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)上PCR产物的长度分析和重复区的克隆和测序来测量亨廷顿蛋白三联体的扩增,我们发现亨廷顿基因座完全稳定。我们的结果反对Fen1在人类细胞中触发Huntingtin三联体扩增中的作用。

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