Subcellular localization of CIAPIN1

doi:10.1369/jhc.6A6960.2006

.2006年12月；54（12）：1437-44。

doi:10.1369/jhc.6A6960.2006。 Epub 2006年9月6日。

CIAPIN1的亚细胞定位

郝志明¹, 李晓华, 台东桥, 芮都, 张国云, 戴明风扇

附属公司

PMID： 16957168
预防性维修识别码：项目经理3958118
内政部： 10.1369/jhc.6A6960.2006年

CIAPIN1的亚细胞定位

郝志明等。组织化学与细胞化学杂志. 2006年12月.

.2006年12月；54(12):1437-44.

doi:10.1369/jhc.6A6960.2006。 Epub 2006年9月6日。

作者

郝志明¹, 李晓华, 台东桥, 芮都, 张国云, 戴明风扇

附属

¹第四军医大学西京医院消化病研究所肿瘤生物学国家重点实验室，陕西省西安市710032。

PMID： 16957168
预防性维修识别码：项目经理3958118
内政部： 10.1369/jhc.6A6960.2006年

摘要

细胞因子诱导凋亡抑制剂1（CIAPIN1）是一种新发现的抗凋亡分子。我们以前的研究表明，CIAPIN1在正常胎儿和成人组织中广泛表达，并可能通过上调多药耐药基因1和多药耐药相关蛋白1的表达，在胃癌细胞中产生多药耐药。然而，CIAPIN1的基本生物学功能尚未阐明。在本研究中，我们首先用生物信息学方法预测了CIAPIN1的亚细胞定位，然后通过以下技术的组合来表征CIAPINl在人和小鼠细胞中的细胞内定位，包括（a）免疫组织化学和免疫荧光，（b）His标记的CIAPINI表达，以及（c）通过Western blotting对组分中CIAPIN1的亚细胞分离和分析。所有方法产生了一致的结果；CIAPIN1定位于细胞质和细胞核，并在核仁中积累。生物信息学预测揭示了人和小鼠CIAPIN1内的假定核定位信号和假定核输出信号。这些发现表明CIAPIN1可能发生细胞质-细胞核-核仁易位。

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数字

图1
正常胎儿和成人组织中CIAPIN1的免疫染色。(A类)胎儿骨骼肌。(B类)胎儿结肠粘膜。(C类)成人大脑。(天)成人胃粘膜。(**A、 C类**)未进行复染色。(**B、 D类**)苏木精复染。箭头表示免疫染色的核仁。棒材=5μm。

图2
CIAPIN1的免疫荧光定位。(A类)免疫荧光法测定CIAPIN1在培养细胞中的亚细胞定位。细胞（HEK293、NIH3T3、QZG和HepG2）用抗CIAPIN1单克隆抗体（MAb）和TRITC结合二级抗体（第一列）染色。细胞核用Hoechst 33258染色（第二列）。Merge表示CIAPIN1免疫荧光和Hoechst 33258染色重叠（第三列）。在阴性对照（NC）合并柱中，CIAPIN1单克隆抗体被免疫前小鼠血清取代，免疫荧光与Hoechst 33258染色合并。箭头表示免疫荧光标记的核仁。(B类)通过抗6His-MAb检测用pcDNA3.1/V5-His-hCIAPIN1转染的HEK293和NIH3T3细胞的免疫荧光染色。在NC融合中，未转染细胞用抗6XHis单克隆抗体进行免疫染色。箭头表示免疫荧光标记的核仁。棒材=2μm。

图3
hCIAPIN1在HepG2亚细胞组分中的分布。HepG2细胞被分为细胞质、细胞核、核质和核仁组分。(A类)用15%SDS-PAGE分离每个细胞组分的100μg样品，并用考马斯亮蓝染色进行可视化，以验证分馏的准确性。(B类)每个组分的50μg样品在15%SDS聚丙烯酰胺梯度凝胶上通过电泳分离，然后通过Western blotting进行分析。平行制备的印迹用右边显示的抗体进行探测。为了控制分馏的保真度，用预先确定的亚细胞定位蛋白的抗体对印迹进行检测：细胞质标记物GAPDH、核标记物组蛋白H1和核仁标记物纤维蛋白。免疫印迹显示每个亚细胞组分中都有～39 kDa的抗CIAPIN1免疫反应带。TC，总细胞裂解物；CP，细胞质；N、细胞核；NP，核质；NO，核仁；M、蛋白质分子量标记。

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