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.2005年6月;11(6):397-404.
doi:10.1093/molehr/gah184。 Epub 2005年5月20日。

RNA干扰人类卵母细胞减数分裂Ⅰ:对人类非整倍体的理解

附属机构

RNA干扰人类卵母细胞减数分裂Ⅰ:对人类非整倍体的理解

海登·荷马等。 Mol Hum再现. 2005年6月.

摘要

虽然女性减数分裂I错误是人类非整倍体的主要原因,但其分子基础基本未知。通过阐明基因功能,利用RNA干扰(RNAi)进行基因敲除可以揭示这个神秘的过程。然而,在实践中,人类未成熟卵母细胞的极度缺乏使得评估基因靶向工具变得困难。在这里,我们对人类卵母细胞进行RNAi,并描述了一种利用小鼠卵母细胞的方法,该方法可以克服生物材料有限的问题。我们设计了一种短干扰RNA(siRNA),命名为si539,以靶向人类有丝分裂阻滞缺陷2(hMad2)纺锤体检查点成分。在微量注射si539的人卵母细胞中,Western blotting检测到的hMad2信号强度比注射对照siRNA的卵母细胞低85-92%,表明有效沉默。使用绿色荧光蛋白(GFP)标记的hMad2 mRNA构建物在小鼠卵母细胞中进一步检测si539的靶向效率。与Western blot分析一致,si539使小鼠卵母细胞中hMad2-GFP的表达降低了约94%,并缓解了小鼠卵母细胞核中hMad 2-GFP诱导的减数分裂I期阻滞。通过促进对参与调节人类女性减数分裂I的候选基因的研究,这种方法可以使我们更接近于了解非整倍体的起源,例如唐氏综合征。

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