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项目:4

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图2

图2。TONSL ARD识别未修饰的H4K20。来源:H4 K20me0标记复制后染色质,并招募TONSL-MMS22L DNA修复复合体。

a、,TONSL ARD与H4尾肽结合的ITC。b、 c、,从具有生物素化H4尾肽的提取物(c)中拉下重组TONSL ARD(b)或GFP-TONSL。日期:,(上图)用生物素化重组单核小体拉下重组TONSL–MMS22L。#,非特定波段。(底部)相对于组蛋白定量的TONSL结合.未付款t吨-试验:*,P<0.05;平均n=6;胡须,异常值。e(电子),如c所示。f、,从溶解的染色质中免疫沉淀GFP-TONSL。,预提取PR-SET7/SET8缺失G1细胞中的TONSL染色质结合。误差线,SD;n=747(siCtrl)、579(siSET8#1)和485(siSET8#2)。数据代表了4(b)、3(c)和2(e-g)个独立实验。肽输入。

朱利娅·萨雷迪等,《自然》;534(7609):714-718.
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图1

图1。TONSL ARD与组蛋白H4尾部相互作用。。来源:H4 K20me0标记复制后染色质,并招募TONSL-MMS22L DNA修复复合体。

a、 b、,TONSL ARD–MCM2 HBD–H3–H4四聚体复合物整体结构的两种不同代表性观点。c、,TONSL ARD和H4尾部之间的分子间相互作用。日期:,ARD的静电势表面显示H4尾部的酸性凹面结合位点。例如,H4 Arg17、His18和Lys20与ARD分子间相互作用的重点。小时,可溶性HA-SNAP-H4野生型(WT)或转染GFP-TONSL U-2-OS细胞的突变体的免疫沉淀。,TONSL ARD WT的ITC和具有H4尾肽的突变体。j个可溶性GFP-TONSL WT或突变体的免疫沉淀。数据代表3个独立实验(h,j)。蛋白质输入。凝胶源数据。

朱利娅·萨雷迪等,《自然》;534(7609):714-718.
三。
图3

图3。H4K20me0是复制后染色质的标志,由TONSL ARD读取。。来源:H4 K20me0标记复制后染色质,并招募TONSL-MMS22L DNA修复复合体。

a、,通过基于SILAC的染色质脉冲质谱分析新的和旧的组蛋白上的H4K20me,用b-dUTP标记并通过NCC分离(来自)。误差线,SD;n=9(S),3(S/G2,M),5(G1);M(旧组蛋白)表示n=2的平均值;另请参见。b、,预提取TIG3成纤维细胞中的TONSL染色质结合显示为DAPI强度或细胞周期阶段的函数。误差线,SD;n=886(G1)、2194(S)和756(G2);显示了具有代表性的单元格。c、 日期:,用MCM2(c)和EdU(d)对染色质结合GFP-TONSL进行共定标分析。(d) 用EdU(左)对细胞进行脉冲处理,或在EdU(右)存在的情况下释放到S期,并用反卷积显微镜进行分析。误差栏,SD;c、 n=13;d从左起,n=9、16、10、9、27、36;显示了具有代表性的单元格。比例尺,5μm。e(电子),通过细胞分馏分析GFP-TONSL的染色质结合,相对于总GFP-TONSL进行量化,并归一化为WT。误差栏,SD;n=5(重量/N571A);n=3(E568A)。未付款t吨-测试:****,P<0.0001。(f),GFP-TONSL的染色质结合分析如b.Error bar,SD;从左起,n=1302、3567、750、1311、3850、838、1495、3221、832、1695、2729、877。数据代表了2个(b-d,f)独立实验。

朱利娅·萨雷迪等,《自然》;534(7609):714-718.
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图4

图4。DNA修复位点的TONSL积累和基因组稳定性需要H4K20me0识别。。来源:H4 K20me0标记复制后染色质,并招募TONSL-MMS22L DNA修复复合体。

a中,CPT处理的S期细胞中GFP-TONSL的染色质结合。误差栏,SD;从左起,n=1461、2631、1245、1764、2116、3178。b、,HU处理后,与来自染色质的Flag-HA-MCM2 WT或组蛋白结合突变体(Y81A,Y90A)共免疫沉淀TONSL-MMS22L。c,对CPT处理细胞中GFP-TONSL向复制叉募集的NCC分析。(-),无生物素dUTP。日期:,AsiSI诱导GFP-TONSL向特定位点DSB募集的ChIP-qPCR分析。有关其他控件,请参阅。e、,GFP-TNSL募集到激光诱导的DNA损伤(误差条,SD;n=3;计数的总细胞数,210(WT)和252(N571))。f、 克,siRNA和CPT处理细胞中GFP-TONSL诱导(+tet)后的集落形成。小时显微镜下分析细胞周期和53BP1病灶。(左)相对于未诱导细胞,显示%G2/M细胞。误差条,SD,n=4(左),5(右)。,染色质结合MMS22L分析如所示。显示了单个数据点的平均值(n=3(未治疗),2(CPT)),参见western印迹。j个,TONSL-MMS22L通过在新组蛋白上结合H4K20me0来识别复制后染色质,将TONSL-MS22L基因组监视功能导向具有姐妹染色单体的DNA。数据代表3(a)、2(b-d、f-right、g)和4(f-left)个独立实验。蛋白质输入。

朱利娅·萨雷迪等,《自然》;534(7609):714-718.

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