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图3。

图3。来源:单核苷酸启动子多态性改变婴儿肥厚性幽门狭窄神经元一氧化氮合酶外显子1c的转录。

突变的功能分析(-277TA、 -273安G、 和-98AG) TGW-nu-I细胞中人类nNOS外显子1c启动子的-84G/A SNP。将所指示的含有nNOS外显子1c 5′-侧翼区的野生型或突变序列的DNA片段连接到无启动子/无增强子萤火虫萤光素酶表达载体pGL3-basic中。不同的报告基因构建与单纯疱疹病毒胸苷激酶启动子驱动的瞬时共转染雷尼利亚荧光素酶表达载体phRL-TK作为内对照。pGL3-basic用作阴性对照。数据表示为三个独立实验的平均值±SD,一式三份。

Dieter Saur等人,《美国国家科学院院刊》,2004年2月10日;101(6):1662-1667.
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图2。

图2。来源:单核苷酸启动子多态性改变婴儿肥厚性幽门狭窄中神经元型一氧化氮合酶外显子1c的转录。

IHPS患者nNOS外显子1c启动子的突变和多态性。(A类)人类nNOS外显子1c的核苷酸序列(粗体)和包括最小启动子在内的部分5′-侧翼区域。转录起始位点表示为+1。之前通过凝胶位移分析和定点突变()测定的顺式作用元件由序列上方的线表示。突变(-277TA、 -273安G、 和-98AG) 在IHPS患者的DNA探针中检测到的-84G/A SNP以粗体显示,并在相对于转录起始位点(+1)的序列下方进行编号。核苷酸序列下方的箭头描绘了报告基因分析中使用的不同nNOS pGL3启动子结构的5′-缺失位点()。(B类)nNOS外显子1c-84G/A SNP的DNA序列分析。(左侧)G/G纯合DNA。(居中)A/A纯合子DNA。(赖特)G/A杂合DNA。核苷酸-84的位置用箭头表示。

Dieter Saur等人,《美国国家科学院院刊》,2004年2月10日;101(6):1662-1667.
三。
图1。

图1。来源:单核苷酸启动子多态性改变婴儿肥厚性幽门狭窄中神经元型一氧化氮合酶外显子1c的转录。

通过实时RT-PCR定量分析IHPS患者和对照组幽门括约肌中人类nNOS mRNA的表达。一组九个正向引物与一个普通的外显子2特异性反向引物和一个内显子2特异性6-羧基荧光素标记的TaqMan探针一起使用,特异性用于nNOS的九个备选第一外显子(外显子1a–1i)。作为总nNOS mRNA表达的参数,一对对所有已知nNOS cDNA中的外显子6和7特异的引物与外显子7特异的内部探针一起使用。通过使用标准曲线并将不同nNOS变体的表达水平除以全局表达的GAPDH持家基因的表达水平来计算转录物的相对量(A类)或神经特异性基因PGP9.5(B类)在相同的RNA制剂中测量。结果显示,9名对照组和16名IHPS患者的幽门括约肌准备的平均±SD。使用给定的一对引物对单个cDNA样本进行三次分析。(C类)通过定量RT-PCR测定对照组和IHPS患者中针对GAPDH标准化的nNOS的不同替代第一外显子的相对量。

Dieter Saur等人,《美国国家科学院院刊》,2004年2月10日;101(6):1662-1667.

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