如有指示,用棕榈酸(C16:0)(P0500)和油酸(C18:1)(O1008)处理细胞(Sigma-Aldrich,中国北京)。通过在DMSO中溶解各自的游离脂肪酸(FFA),制备了0.1 M储备溶液。对照细胞用类似浓度(v/v)的二甲基亚砜载体对照物处理。细胞暴露于指定时间,以1:2棕榈酸:油酸的摩尔比增加外源FFA的新鲜混合物浓度。血液中的大部分FFA与血液一起携带,因为FFA本身在水相中高度不溶。因此,血清FFA水平是由血清总FFA与血清总白蛋白的比值决定的。在当前的研究中,FFA与牛血清白蛋白(BSA)以4:1的摩尔比络合,这与由于添加FBS而在细胞培养基中预先存在的白蛋白浓度一致。
探讨H的保护作用2对于FFA诱导的炎症反应,细胞在FFA治疗前用400μM硫化钠(NaHS)(Sigma-Aldrich)预处理30分钟[23-25岁]. 为了证实TLR4的作用,用5μM TAK-242(TLR4抑制剂)(ThermoFisher Scientific)和FFA处理细胞为了确认NF-κB的作用,在FFA治疗前用10µM BAY11-7082(NF-κ的抑制剂)(Sigma-Aldrich)预处理细胞1小时。