酶测定法(比色法)
水果、蔬菜制品、啤酒、葡萄酒、牛奶、肉制品、小麦粉等食品、动物饲料、医药品(维生素配方、镇痛剂、解热剂)、生物样品(血清、尿液等)中L-抗坏血酸的测定。
分析物
L-抗坏血酸虽然量不同,但存在于所有动物、植物细胞中。人自身不能合成L-抗坏血酸,外部的供给源(维生素C),通常主要依靠水果和蔬菜。
由于技术原因,L-抗坏血酸被用作食品的抗氧化剂。L-抗坏血酸是一种相对“敏感”的物质,其分析可用于评价以果蔬为原材料的食品制作过程的质量。
L-抗坏血酸被用作某些药品,例如维生素产品和镇痛剂的制造成分。
另外,作为动物饲料的添加剂使用。
原理
特异性
在测定条件下,该方法对L-抗坏血酸有特异性。
通过合成被制造作为抗氧化剂使用的D-抗坏血酸(异抗坏血酸)是慢的速度反应。
灵敏度和测量极限
测量灵敏度基于样品量(v)为1.600ml时的0.005吸光度。这相当于(578nm)测量时约0.1℉/l(样品溶液)的L-抗坏血酸浓度。
0.3mg/l的测量极限来源于最大样品量(v)为1.600ml时的吸光度变化量0.015。
线性
测量的线性为0.5μg L-抗坏血酸/测定(0.3mg L-抗坏血酸/l样品溶液:v=1.600ml)至20μg L-抗坏血酸/测定(0.2g L-抗坏血酸/l样品溶液:v=0.100ml)之间。
准确性
对一个样品进行双重测量时,会产生0.005至0.010的吸光度差异。标准偏差值在测量范围内为1~3%。
干扰物/误差原因
食品成分通常不干涉测量。高浓度的酒精和D-山梨糖醇会减缓反应速度。
大量的亚硫酸必须加入甲醛去除。草酸阻碍酶AAO。
金属、亚硝酸离子逐渐分解L-抗坏血酸。