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免疫荧光(IF)或细胞成像技术依赖于使用抗体用荧光染料(也称为荧光团或荧光染料)例如荧光素 异硫氰酸盐(FITC公司). 化学标记为荧光团通常用于IF。
结合抗体和非结合抗体的区别是什么?
这个荧光团允许在荧光显微镜下可视化样品中的目标分布(如 外荧光和共聚焦显微镜). 我们根据是否荧光团与一级或二级抗体结合:
下图表示直接和间接方法。
这两种方法各有优缺点,如下表所示。
直接IF协议通常较短,因为它们只需要一个标记步骤。
直接和间接方法不限于免疫荧光。它们还与其他依赖荧光结合抗体的技术有关,如流式细胞术、ELISA、western blot和免疫组织化学。
即使使用间接方法,检测低丰度蛋白质有时也很有挑战性。 生物素化抗体为增强信号放大提供了额外的一层。进一步了解基于生物素结合抗体的使用方法的工作原理在这里.
Alexa Fluor公司®是Life Technologies的注册商标。Alexa Fluor公司®染料共轭物包含生命科技授权给Abcam的技术。