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找到你的KO细胞系
敲除(KO)细胞系有助于克服在分析开发过程中获取正确对照物的挑战,并能够对基因型和表型之间的关系进行自信的询问。
然而,生成CRISPR KO细胞系是很耗时的,在获得所需的特定CRISRP编辑之前,平均需要重复三到四次CRISPR-工作流程1.
为了给您这次机会,我们已经在准备就绪的常用细胞系中建立了大量现成和按订单制作的敲除细胞,使CRISPR敲除细胞系与试剂一样容易购买。
我们的CRISPR敲除细胞株目录旨在缩短您四个多月的准备时间,让您从数月的实验工作中轻松点击即可获得所需的CRISRP敲除细胞系,这意味着您可以获得更多数据并更快地发布。
它是加速您的计划的最快、最经济高效的选项。
我们的基因审查细胞系的益处
我们如何生成基因审查细胞系
1.细胞系选择
每个敲除细胞系都从选择最合适的靶基因和背景细胞系开始。我们的选择是与研究团体密切合作进行的,以确保我们始终支持我们的客户使用与他们的研究和应用需求最相关的细胞系。
我们从标准储存库中获得背景细胞系,例如美国型培养物收集中心(ATTC),该收集中心经过充分验证和认证,不含支原体。
如果我们以前没有使用过一条线,我们会进行一次彻底的评估以检查其适用性,包括确认感兴趣的蛋白质在野生型细胞中表达,并确保在靶细胞被敲除后,细胞会生长并保持活性。
除了使用HEK和HeLa等主要细胞系外,我们还可以在各种生理相关和疾病相关背景下产生敲除。例如,CD74在淋巴瘤中高度表达,因此我们生成我们的人CD74敲除线在Raji淋巴瘤细胞系中。
2.CRISPR导向器设计
我们的高通量平台使我们能够大规模自动化生产CRISPR敲除细胞系。这减少了生产基因编辑单克隆细胞系所需的时间,因此您可以获得宝贵的实验室时间,对可扩展和长期供应充满信心,并随着时间的推移取得一致的结果。
成功建立CRISPR敲除细胞系依赖于选择合适的导向RNA;我们的CRISPR指南RNA是使用基于网络的综合gRNA设计工具(包括基于比对的评分和假设驱动的方法)精心设计和优化的,以提高靶向的准确性和效率。
重要的是,我们采用了双RNA系统,使用两个引导识别目标序列周围的侧翼位点,而不是单个位点。这会产生一个小片段缺失,保证了完整的蛋白质敲除,并将我们的典型敲除效率提高到95%以上,而单导效率约为55%。这减少了我们的筛选时间2,3并转化为我们客户的成本效率和可靠性。
3.转染
一旦我们设计好了RNA指南,就需要将CRISPR成分转染到细胞中,开始编辑过程。
传统上,CRISPR系统的成分通过DNA质粒传递到细胞中,依赖细胞表达Cas酶并引导编辑所需的RNA。但这项技术可能会带来不确定性,因为它依赖于细胞对所有CRISPR系统成分的有效转录。它还允许CRISPR系统持续表达,增加了非目标编辑的可能性,并将外部质粒DNA留在细胞中,这可能会导致后续问题。
我们采取了不同的方法。通过将预先组装好的CRISPR核糖核蛋白复合物直接输送到细胞中,我们受益于消散的瞬时编辑系统,因此没有连续的CRISRP表达,也没有留下额外的遗传物质。除了提高准确性外,该系统还允许我们在转染前对导向RNA进行化学修饰,以进一步提高特异性4.
编辑过程完成后,我们使用克隆选择工作流(随后是广泛的验证过程)创建同源敲除细胞系。
我们对批量转染的细胞“池”进行CRISPR,然后使用下一代和Sanger测序对其进行筛选,以确认编辑效率。然后对包含成功编辑的细胞的池进行单细胞克隆和扩展,以创建克隆细胞群。
我们的KO细胞系使用CRISPR/Cas9技术生成KO细胞系为单克隆,并通过Sanger测序进行验证。具体突变描述请参考数据表。
是的,细胞系库由独立的第三方进行支原体检测,Bionique公司采用肉汤琼脂法。我们还定期检查库存。
对。拜托联系我们的科学支持团队他们可以提供给你。
如果您不打算立即复苏,我们建议您在收到药瓶后立即将其储存在液氮中。
我们建议您使用我们的WT,这是免费提供的每个淘汰细胞株订单(不可用于个人购买)。请参阅数据表以确定要添加到KO细胞系订单中的WT。 或者,您可以联系我们如果你有任何问题。
当您购买KO细胞系时,WT是免费的,但您需要将其单独添加到您的订单中。请参阅KO细胞系数据表中的一般注释部分,了解我们推荐的WT以及如何订购。如果你有问题,你可以联系我们的科学支持团队.
我们的KO细胞系根据细胞系分为BSL1和BSL2。A549、HCT116、HEPG2和MCF7等细胞系为BSL1。EK-293T和HeLa细胞系是BSL2
我们的KO细胞系由我们的阿布诺瓦™担保这意味着我们保证细胞系不含支原体,并通过Sanger测序在基因组水平上进行验证。
这些单元格都小于第20段。请联系我们如果你想知道你的标段的确切通道号。
这些克隆是使用嘌呤霉素耐药性来选择的,但是这些细胞并不是在嘌呤菌素或其他抗生素的存在下生长的。
请参考KO细胞系数据表和我们的细胞培养协议.
细胞处于细胞冷冻介质-二甲基亚砜无血清培养基中。有关更多信息,请参阅KO细胞系的数据表。
使用此图表帮助确定最适合您研究的试剂-如果您仍不确定,联系.
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