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抗体稀释指南,包括优化抗体浓度和建议稀释的技术。
下载我们的抗体基础综合指南。
2022年5月10日更新
当第一次使用抗体时,您可能需要根据您的具体应用和实验设置优化其稀释度。在这里,我们描述了如何通过滴定确定最佳抗体浓度,并在数据表上提供建议的抗体稀释度,而不建议稀释。
抗体和抗原之间的结合速率(亲和力常数)可能受温度、pH值和缓冲液成分的影响。改变抗体和抗原溶液的相对浓度也可以控制抗体-抗原复合物形成的程度。由于通常不可能改变抗原浓度,因此必须使用稀释液确定每种抗体的最佳工作浓度,以适应每种应用和一组实验条件。
通常,针对数据表中包含的各种应用,抗体都建议稀释。然而,它们可能需要在您的特定实验设置中进行一些优化。
搜索初级抗体。
最佳抗体浓度是指在最低背景下产生最佳染色效果的抗体浓度,必须对每次试验进行实验测定,通常在滴定试验中使用一系列稀释液进行测定。例如,如果产品数据表建议使用1:200稀释度,建议稀释度为1:50、1:100、1:200、1:400和1:500。
首先选择一个固定的培养时间,然后选择抗体的一系列实验稀释液,进行滴定实验。每种稀释液应在相同的样品类型上进行测试,以保持相同的实验条件。
许多抗体具有类似的批间一致性;因此,在大多数情况下只需要一次滴定实验。然而,特别是对于多克隆抗体,当同一抗体批次之间的染色结果发生变化时,我们建议进行另一次滴定实验。
未经纯化的抗体制剂在抗体浓度上存在显著差异。如果已知未纯化抗体制剂的特定抗体浓度未知,我们建议使用浓缩/纯化试剂盒,并参考下表作为指南。
此表提供了在每次应用中使用的不同稀释液抗体格式:
EIA=酶免疫分析,FACS=荧光激活细胞分类,ICC=免疫细胞化学,IHC=免疫组织化学,IP=免疫沉淀,WB=免疫印迹。
返回抗体指南。
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