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初级抗体的选择对IHC实验的成功至关重要。初级抗体最重要的特征是其对目标抗原的特异性。然后检测抗体直接地通过直接与一级抗体结合的标签,或间接地使用针对宿主物种和一级抗体的抗体类型和亚型的标记二级抗体。用荧光标记或酶将可溶性底物转化为不溶性底物来观察抗体发色的产品。
典型免疫染色方案中的步骤如下所示。在直接免疫染色方法中,省略了与二级抗体的孵育步骤。荧光检测中省略了添加底物的最后一步。
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