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血管内皮生长因子受体2具有酪氨酸激酶活性,与VEGFA、VEGFC、VEGFD结合激活后能够介导内皮细胞的增殖、侵袭和迁移,提高血管透性和新血管形成。
成熟的血管内皮生长因子受体2为糖基化的跨膜蛋白,分子量为230 KDa由胞外域(ECD)、跨膜域(TMD)、近膜域(JMD)、酪氨酸激酶域(TKD)和C类端域(CTD)组成。电子海图负责结合血管内皮生长因子使血管内皮生长因子受体2发生二聚化;TMD公司和JMD公司调控激酶活性;TKD公司和CTD公司激活信号通路。
人源血管内皮生长因子受体2包含18个N个-糖15个磷酸化位点及多个列车自动防护系统结合、底物结合位点,这些位点对于蛋白的折叠、激活、转录后修饰、细胞附着和功能调节具有重要作用。
蔬菜-2激活后可介导下游信号通路中许多蛋白的磷酸化(例如Akt、mTOR、Erk1/2、FAK和 p70S6K)促进肿瘤血管生成。
表达广泛。
血管内皮细胞、血管瘤组织中常见。
内质网、细胞膜。
人源血管内皮生长因子受体2异构体1(第35968-1页):细胞膜、细胞质、内体、细胞核。
人源血管内皮生长因子受体2异构体2、 3(第35968-2、3页):分泌至胞外。
人(第35968页):异构体1:152千达(预测);异构体2-3:76-80千达(预测)
小鼠(第35918页):异构体1:151千达(预测);异构体2:76千达(预测)
大鼠(O08775):151 KDa(预测)
N个-糖磷酸化,中国
在工作分解结构实验中,血管内皮生长因子受体2可能会检测到多条条带,因为在人和小鼠中,血管内皮生长因子受体2不仅有多个异构体,还存在翻译后修饰。
血管内皮生长因子受体2是跨膜蛋白,建议提取膜蛋白来进行工作分解结构检测。
血管内皮生长因子受体2容易降解,在工作分解结构实验中,建议使用新鲜的裂解液,当天完成样品制备和跑胶,避免裂解液反复冻融。
血管内皮生长因子受体2的磷酸化修饰可能需要条件诱导(例如使用约5475时,HT-29/Caco-2型需要先进行血清饥饿,再添加100纳克/毫升SCF处理10分钟)有助于解决信号弱或者无信号现象。
HUVEC公司全细胞裂解液
尤尔卡特,赫拉,K562,NIH/3T3HUVEC全细胞裂解液
在实验中除了需要注意常规问题外,还要特别关注以下关键控制点:
样本制备
添加足够量的复合蛋白酶抑制剂以避免靶标蛋白降解。
选择合适的裂解液来富集更多靶标蛋白。
整个样本制备过程中,保持样本置于冰上。
通过布拉德福德分析、劳里分析或业务连续性分析分析
电泳
至少上样20微克总蛋白进行电泳。
对于分子量较大的靶标蛋白,建议使用较低浓度的分离胶进行电泳。
转膜
对于分子量较大的靶标蛋白,建议在转膜缓冲液中加入SDS公司至终浓度为0.1%。
对于分子量较大的靶标蛋白,建议使用0.45微米的聚偏氟乙烯膜。
对于分子量较大的靶标蛋白,建议转膜缓冲液中使用10%甲醇或更低浓度。
建议转膜完成后使用丽春红染色,确定转膜是否成功(如果选择荧光标记检测,请确保丽春红完全清洗干净)。
封闭
没有适用于所有体系的封闭液,请选择合适的封闭液。
Veli-Matti Leppanen、Andrea E Prota、Michael Jeltsch等。VEGF受体2结合生长因子和特异性的结构决定因素。程序。国家。阿卡德。科学。美国(2010)。107(6):2425–2430.doi:10.1073/pnas.0914318107