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β-连环蛋白作为一种粘附连接蛋白,与E类-钙粘蛋白、α-连环蛋白等共同组成粘附连接复合体, 通过调控细胞生长以及胞间粘附,维持正常的组织结构和形态发生。
β-连环蛋白是经典Wnt(重量)信号通路下游的关键功能效应分子,在胚胎发育、组织稳态和肿瘤发生发展中至关重要。
Wnt(重量)信号缺失时,β-连环蛋白与AXIN1、AXIN2、APC、CSNK1A1、GSK3B结合形成复合体,促进其N个端 序列号和 瑟残基的磷酸化。CTNNB1公司通过BTRC公司发生泛素化,随后被蛋白酶体降解。
Wnt(重量)配体存在时,CTNNB1公司不会被泛素化并在细胞核中积累。它作为 TCF/LEF公司家族转录因子的共激活因子可以激活 Wnt(重量)响应基因,如编码促进细胞增殖的细胞周期蛋白 D类和 c-myc基因的基因。
CTNNB1公司的异常激活与肿瘤发生相关,如结肠癌、卵巢癌和前列腺癌、肝母细胞瘤、肝细胞癌等。
毛囊细胞中表达:如基底和外周基质细胞,毛根鞘的内、外层细胞。
大脑皮质神经细胞中表达。
结肠、乳腺癌组织中表达。
细胞连接、细胞膜、细胞质、细胞骨架、细胞核、神经突触。
细胞质中定位的β-连环蛋白多于细胞骨架。 细胞连接处定位的β-连环蛋白多于粘附连接。
当β-连环蛋白不稳定(高度磷酸化)或与CDH1型结合时,会定位于细胞质。
当β-连环蛋白稳定(低度磷酸化)时,会转移到细胞核。
β-连环蛋白与 GLIS2公司和 MUC1公司互作时会促进核转运, 与 EMD公司互作时会抑制核转运。
人(P35222):86 KDa(预测)
小鼠(Q02248):86 KDa(预测)
大鼠(Q9WU82):86 KDa(预测)
磷酸化
中国
巯基亚硝基化
O(运行)-糖基化
去乙酰化
请注意不同样本中靶标蛋白的表达量存在差异,检测前需要确认靶标蛋白表达量。 建议设置阳性和阴性对照。
由于不同类型的后修饰形式(如磷酸化), 工作分解结构中观察到的β-连环蛋白条带大小可能与预测的分子量大小不完全一致。
人 赫拉全细胞裂解液
人CTNNB1(β-儿茶素)敲除HeLa全细胞裂解液(约263756)
在实验中除了需要注意常规问题外,还要特别关注以下关键控制点:
样本制备
添加足够量的复合蛋白酶抑制剂以避免靶标蛋白降解。
整个样本制备过程中,保持样本置于冰上。
通过布拉德福德分析、劳里分析或业务连续性分析分析
电泳
至少上样20微克总蛋白进行电泳。
封闭
5% 脱脂奶粉或 英国标准协会溶液室温或者 37℃缓慢摇荡 1-2小时