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纤维结合蛋白(纤DNA和肌动蛋白等。
纤维结合蛋白可以分为血浆纤连蛋白(血浆FN)和细胞纤连蛋白(cFN)在血浆中以可溶性二聚体形式存在,而在细胞表面和细胞外基质中以二聚体或多聚体形式存在。血浆纤连蛋白由肝细胞合成,并以一种非活性、紧密的构象存在于血流中,它是纤维蛋白凝块的一个主要组分。细胞纤连蛋白由包括结缔组织、骨和牙周组织在内的常驻细胞在多种不同组织中产生。
纤维结合蛋白参与细胞粘附和迁移过程,包括胚胎发生、伤口愈合、血液凝固、纤维化和肿瘤进展等等。
血浆中的纤维结合蛋白(可溶性二聚体形式)由肝细胞分泌。
成纤维细胞、上皮细胞和其他细胞来源的纤维结合蛋白(二聚体或交联多聚体形式)以原纤维形式沉积在细胞外基质中。
纤维结合蛋白具有三个可变剪接区域,有可能产生 20种不同的转录突变体。
纤维结合蛋白是一个高分子量的糖蛋白,并且存在多种翻译后修饰。
纤维结合蛋白主要存在于细胞外基质。
人(P02751): 异构体2、 16(P02751-2、P02751-16):72~74 kDa(预测) 异构体4、 12(P02751-4、P02751-12):221~223 kDa(预测) 异构体1、 3(P02751-1、P02751-3):259~263 kDa(预测) 异构体5~11(P02751-5~P02751-11):240~269 kDa(预测) 异构体13、 14、17(P02751-13、P02751-14、P0751-17):249~257 kDa(预测) 小妞(P11276):273千Da(预测) 大鼠(P04937): 异构体1~4(P04937-1~P04937-4):259~273 kDa(预测)
纤维结合蛋白可能发生硫酸化修饰
糖基化修饰
磷酸化修饰
交联
纤维结合蛋白存在糖基化等蛋白翻译后修饰,实际检测条带可能与预测值可能不符。通常会在膜上约285千Da位置出现拖带(如图三所示)。强烈建议不要裁膜,以防丢失目的条带。
纤维结合蛋白是大分子量糖蛋白,推荐使用大分子量蛋白的电泳转膜条件进行实验。
纤维结合蛋白可以分为血浆纤连蛋白(血浆FN)和细胞纤连蛋白(cFN)请选择合适的实验样本,有些样本可能会出现弱表达或无表达的情况。推荐使用阳性对照,以确认实验体系没有问题。
人血清
在实验中除了需要注意常规问题外,还要特别关注以下关键控制点:
样本制备
添加复合蛋白酶抑制剂以避免靶标蛋白降解。
中国
通过布拉德福德分析、劳里分析或业务连续性分析分析测定样本总蛋白浓度。
电泳
对于分子量较大的靶标蛋白,请使用较低浓度的分离胶(如6~8%)进行电泳。
至少上样20微克总蛋白进行电泳。
转膜
建议转膜完成后使用丽春红染色,确定转膜是否成功。
不推荐裁膜,保留全膜进行实验。
对于分子量较大的靶标蛋白,建议使用0.45微米的聚偏氟乙烯膜。
对于分子量较大的靶标蛋白,建议转膜缓冲液中使用10%甲醇或更低浓度。
对于分子量较大的靶标蛋白,建议在转膜缓冲液中加入SDS公司至终浓度为0.1%。
抗体孵育
请根据产品说明书选择合适的抗体工作浓度。