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愤怒作为免疫球蛋白超家族的一员,是一种多配体模式识别受体。可以介导晚期糖基化终产物(年龄)工作,工作
愤怒结合并介导细胞对一系列DAMP公司(损伤相关分子模式分子)的反应,例如AGEs、HMGB1和S100标准并且作为先天免疫识别受体,可以识别微生物PAMP公司()LPS、细菌DNA以及病毒和寄生虫蛋白。
年龄/年龄信号在NF-κB、氧化应激和内皮功能障碍中发挥重要作用,从而产生促炎性细胞因子和炎症。
愤怒在正常生理条件下以低水平表达,但在慢性炎症下由于各种 愤怒配体的积累而高度上调。愤怒与糖尿病血管并发症、心血管疾病和癌症进展相关。
愤怒通常在正常组织中都是低表达的,只有在肺组织中是高表达的。在很多慢性炎症中表达上调。建议添加肺组织作为阳性对照。
愤怒主要表达于内皮细胞。
愤怒主要定位于细胞膜,异构体2是分泌型蛋白。
人(Q15109):异构体1-10:13-44千帕(预测)
小妞(Q62151): 异构体1、 5、10:22-43kDa(预测) 异构体7-9、11-13:3-16千Da(预测)
大鼠(Q63495):43 kDa(预测)
愤怒存在糖基化修饰
二硫键
愤怒中国(图3)。在很多慢性炎症中表达上调。
请确认实验样本(尤其是细胞系)是否能够检测到愤怒蛋白表达,或者样本是否需要炎症诱导刺激才能够检测到愤怒蛋白。建议添加肺组织作为阳性对照,以确认实验体系没有问题。
由于愤怒存在糖基化翻译后修饰并且存在多个异构体现象,工作分解结构实验中可能实际检测到两条条带或者模糊的拖带,与预测分子大小43千帕不符(图4)。
大鼠肺组织/小鼠肺组织
在实验中除了需要注意常规问题外,还要特别关注以下关键控制点:
样本制备
推荐提取细胞膜组分进行实验。
添加复合蛋白酶抑制剂以避免靶标蛋白降解。
整个样本制备过程中,保持样本置于冰上。
通过布拉德福德分析、劳里分析或业务连续性分析分析测定样本总蛋白浓度。
电泳
至少上样20微克总蛋白进行电泳。
转膜
建议转膜完成后使用丽春红染色,确定转膜是否成功。
不推荐裁膜,保留全膜或70千帕以下膜进行实验。
抗体孵育
请根据产品说明书选择合适的抗体工作浓度。