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比较研究
.1995年10月24日;215(3):1119-29.
doi:10.1006/bbrc.1995.2579。

内皮型一氧化氮合酶(NOS-III)的半胱氨酸99对四氢生物蝶呤依赖的NOS-III的稳定性和活性至关重要

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比较研究

内皮型一氧化氮合酶(NOS-III)的半胱氨酸99对四氢生物蝶呤依赖的NOS-III的稳定性和活性至关重要

P F陈等。 生物化学-生物物理研究委员会. .

摘要

四氢生物蝶呤(BH4)是一氧化氮合酶(NOS)所有三种亚型的必要辅因子。然而,其结合位点和功能作用仍然难以捉摸。在这里,我们证明了人内皮细胞NOS(ecNOS)的cys-99对BH4参与NOS催化活性和稳定性至关重要。ecNOS中cys-99突变为丙氨酸导致催化活性丧失,通过向粗提物中添加高浓度的外源BH4可以将其恢复到野生型水平。纯化的C99A突变体不稳定,其最大活性仅为纯化野生型活性的20%左右。C99A和野生型之间BH4浓度依赖性瓜氨酸形成的比较表明,产生半最大瓜氨酸所需的BH4浓度是C99A的10倍。纯化的C99A没有检测到BH4,与纯化的野生型相比,血红素含量降低,但保留了形成钴铁血红素复合物的能力,L-精氨酸的Km值(约4微米)与野生型相同。这些发现表明Cys-99与BH4结合密切相关。该残基的突变导致对BH4的亲和力降低,从而导致酶不稳定和不可逆的血红素损失。

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