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.2019年6月；17(6):1253-1263.
doi:10.1158/1541-7786.MCR-18-1054。 Epub 2019年3月1日。

胆固醇硫转移酶SULT2B1b调节去势抵抗前列腺癌对死亡受体配体TNFα的敏感性

蕾妮·E·维克曼 1, 姜阳 1, 纳迪娅·兰曼 2, 格雷戈里·克雷斯韦尔 1, 郑菲（Faye Zheng） 三, 张驰（Chi Zhang） 4, R W Doerge公司 5, 斯科特·克里斯特 1, 安德鲁·梅塞卡 2 6, Chang-Deng Hu公司 2 7, 蒂莫西·拉特利夫 8 2
附属公司

胆固醇磺基转移酶SULT2B1b调节去势抵抗性前列腺癌对死亡受体配体TNFα的敏感性

蕾妮·E·维克曼等。 摩尔癌症研究. 2019年6月.

摘要

胆固醇硫转移酶SULT2B1b已被证明可以调节雄激素受体活性和细胞生长特性。然而，SULT2B1b改变前列腺癌细胞内这些特性的机制尚未描述。此外，尚不清楚SULT2B1b在前列腺癌细胞中表达的具体优势。在这些研究中，进行了单细胞mRNA测序，以比较SULT2B1b敲除（KD）和对照KD LNCaP细胞的转录体。超过2000个差异表达基因被鉴定，同时许多典型通路也发生了改变，包括死亡受体信号通路。本文的研究表明，SULT2B1b KD增加前列腺癌细胞中TNFα的表达，并以TNF依赖的方式导致NF-κB活化。更重要的是，SULT2B1b KD显著增强TNF-敏感LNCaP细胞和TNF-耐药C4-2细胞中TNF-介导的凋亡。LNCaP细胞中SULT2B1b的过度表达也降低了对TNF介导的细胞死亡的敏感性，这表明SULT2B1调节了决定前列腺癌细胞TNF敏感性能力的途径。通过提供SULT2B1b表达与TNF相关基因呈负相关的证据，探索人类前列腺癌患者数据集进一步支持了这项工作，包括TNF、CD40LG、FADD、和NFKB1型总之，这些数据提供了证据，证明前列腺癌细胞中SULT2B1b的表达增强了对TNF的抵抗力，并可能提供生长优势。此外，靶向SULT2B1b可能会增强晚期前列腺癌对TNF治疗的疗效。这些数据表明，SULT2B1b的表达增强了对TNF的抵抗力，并可能促进前列腺癌的发生。

PubMed免责声明

利益冲突声明

利益冲突声明：这份手稿的作者声明没有潜在的利益冲突。

数字

图1。
图1..SULT2B1b KD的scRNA-seq与对照KD细胞证实AR活性降低。
（A） 测序的单个细胞数量概述。（B） 多维标度（MDS）图强调了单个细胞组之间因治疗而产生的差异。“C”表示控制KD，“KD”表示SULT2B1b KD。（C） 数量SULT2B1系列对于对照KD（对照组）或SULT2B1b KD（敲除组）组，指示单细胞水平上SULT2B1 b表达的读数。右上角表示每组中读取计数为零的单元格的百分比。（D） 左：小提琴图，表示scRNA-seq组AR的表达（读取计数）；右：qRT-PCR表达应收账从转染后48小时的大量样品中提取。（E） 显示AR靶基因的小提琴图。每个基因的表达（读取计数）用调整后的p值表示。
图2。
图2.SULT2B1b KD预计会激活scRNA-seq中的TNF和NF-κB。
紫罗兰图表示对照KD中指定NF-κB靶基因的表达（读取计数）与SULT2B1b KD组的scRNA-seq分析，调整后的p值显示在左上角。
图3。
图3 SULT2B1b KD诱导LNCaP中TNF表达并激活NF-κB，但不激活C4-2细胞。
用对照或SULT2B1b siRNA转染LNCaP和C4-2细胞，并评估（A-B）TNF表达或（C-D）NF-κB活性。（A） qRT-PCR用于TNF公司siRNA KD后72小时表达。（B） siRNA KD后72小时，用基于细胞裂解物的ELISA定量TNF蛋白表达。（C） 荧光素酶检测在siRNA转染48小时后完成。NF-κB荧光素酶活性标准化为雷尼利亚荧光素酶。样品进一步标准化，以控制孔，无siRNA转染。横线表示使用Student t检验的至少四个独立实验的平均+/-SEM。（D） siRNA KD后72小时对指示蛋白进行Western blot。
图4。
图4 SULT2B1b KD细胞中TNF的表达是NF-κB活化的原因，但不是诱导细胞死亡。
（A） pRT-PCR指示SULT2B1b型和TNF公司连续转染SULT2B1b siRNA和TNF siRNA的LNCaP细胞中的表达。通过单因素方差分析和多重比较试验确定显著性。（B） NF-κB荧光素酶检测在siRNA转染48小时后完成，并显示相对荧光素酶单位（RLU）。条形图表示仅考虑对照KD和SULT2B1b KD组的双向方差分析得出的至少三份样品的平均+/-SEM，该图代表两个独立实验。（C） 用TNF中和抗体（40µg/mL）预处理LNCaP细胞，然后用对照或SULT2B1b siRNA转染或用指定浓度的外源性TNFα处理。在siRNA转染后约72小时，收获细胞并制备用于通过流式细胞术进行细胞周期分析。条形图表示三份样品的平均G1亚核+/-SEM百分比。该图代表了至少两个独立的实验。
图5。
图5.SULT2B1b调节LNCaP和C4-2细胞对TNF介导的细胞死亡的敏感性。
在添加指定浓度的TNF之前，用对照或SULT2B1b siRNA转染LNCaP（A）或C4-2（B）细胞。72小时后收集所有细胞，并通过流式细胞仪进行细胞周期分析。条形图表示三次孔的亚G1细胞核+/−SEM的平均百分比。对于（A）和（B）中的所有TNF处理细胞，通过双向方差分析，SULT2B1b KD显著提高LNCaP和C4-2细胞中G1以下细胞核的百分比（p<0.0001）。图是三个独立实验的代表。通过（C）qRT-PCR和（D）western blot评估LNCaP-SULT2B1b细胞中（C-D）SULT2B1b的表达。（E） 在添加指定浓度的TNF之前，用强力霉素处理LNCaP-SULT2B1b细胞。72小时后，收集所有细胞并通过流式细胞仪进行细胞周期分析。条形图表示通过双向方差分析和多重比较测试评估的三个孔的%亚G1核+/-SEM平均值。该图代表重复实验。
图6。
图6：SULT2B1b的表达与人类患者中的许多TNF相关基因相关。
（A） 基因共表达表明SULT2B1系列与…负相关TNF公司,CD40长度,贸易、和TRAF2型来自未接受过治疗的人的骨髓源性转移性前列腺癌样本。（B） 共同表达SULT2B1系列具有NFKB1型,FADD公司和DR4确定了与淋巴结衍生CRPC样本中每个基因的显著负相关。（C） 基因共表达SULT2B1系列与RANKL在骨髓源性前列腺癌样本中显示出强烈的正相关。皮尔逊相关系数（r）和通过置换测试（p）确定的p值表示为每个相关图。圆点表示从单个患者中获得的样本。
图7。
图7。
SULT2B1b对晚期激素性前列腺癌和CRPC细胞中死亡受体信号和AR活性的影响示意图。
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