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.2018年4月；38（4）：e36-e47。
doi:10.1161/ATVBAHA.117.310656。 Epub 2018年2月15日。

RGC-32（补体32反应基因）缺陷保护内皮细胞免受炎症和减轻动脉粥样硬化

崔晓兵 1, Jun Na Luan先生 1, Kun Dong（昆东） 1, 陈思思 1, 王永毅（Yongyi Wang） 1, 温迪·T·沃特福德 1, 陈世友 2
附属机构

RGC-32（补体32反应基因）缺陷保护内皮细胞免受炎症和减轻动脉粥样硬化

崔晓兵等。 动脉硬化血栓血管生物. 2018年4月.

摘要

目标：本研究的目的是确定RGC-32（补体32蛋白反应基因）在动脉粥样硬化形成中的作用和潜在机制。

方法和结果：RGC-32主要表达于两种ApoE中动脉粥样硬化病变的内皮细胞-/-（载脂蛋白E缺乏）小鼠和人类患者。Rgc公司-32缺陷(32卢比-/-)减轻高脂饮食诱导和自发发展的ApoE动脉粥样硬化病变-/-不影响血清胆固醇浓度的小鼠。32卢比-/-似乎在不改变胶原和平滑肌含量或病变巨噬细胞增殖的情况下降低了巨噬细胞含量。WT（野生型）小鼠骨髓移植到致命照射32卢比-/-小鼠没有改变32卢比-/--导致病变形成和巨噬细胞聚集减少，表明RGC-32在常驻血管细胞而非巨噬细胞中在动脉粥样硬化形成中起关键作用。重要的是，32卢比-/-体内外内皮细胞中ICAM-1（细胞间黏附分子-1）和VCAM-1（血管细胞黏附分子1）的表达降低，导致TNF-α（肿瘤坏死因子-α）诱导的单核细胞-内皮细胞相互作用降低。从机制上讲，RGC-32通过NF（核因子）-κB信号通路至少部分地介导ICAM-1和VCAM-1的表达。RGC-32直接与NF-κB相互作用，促进其核转位，并增强TNF-α诱导的NFκB与ICAM-1和VCAM-1启动子的结合。

结论：RGC-32通过NF-κB信号通路诱导内皮细胞ICAM-1和VCAM-1表达，至少部分地促进单核细胞-内皮细胞相互作用，从而介导动脉粥样硬化形成。

关键词：动物；动脉粥样硬化；内皮细胞；人类；老鼠。

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数字

图1
图1。在动脉粥样硬化病变的内皮细胞中诱导RGC-32表达
A类，RGC-32在人类正常血管以及早期和晚期动脉粥样硬化病变中的免疫组织化学染色代表性图像。阴性对照用正常兔IgG染色。比例尺：200μm。B类，RGC-32表达的量化如A所示**P（P）与正常血管组（n=3）相比，<0.01。Nor：正常血管；耳朵：早期；高级：高级阶段。C类、野生型（WT）和ApoE主动脉根部RGC-32免疫组化染色的代表性图像−/−喂食食物或高脂肪饮食（HFD）12周的小鼠。阴性对照用正常兔IgG染色。比例尺：200μm。D类，RGC-32表达的量化如B所示**P（P）与ApoE相比<0.01−/−chow组（n=6）。E类，ApoE主动脉根部RGC-32（绿色）、CD31（红色，EC）和4′，6-二氨基-2-苯基吲哚（DAPI，蓝色，细胞核）免疫荧光染色的代表性图像−/−喂食HFD 12周的小鼠（n＝6）以及晚期人类动脉粥样硬化病变中的小鼠（n＝3）。阴性对照用正常IgG染色。比例尺：100μm。
图2
图2。RGC-32缺乏减轻ApoE饮食诱导的动脉粥样硬化−/−小鼠
A-D公司，载脂蛋白E−/−（n=8）和ApoE−/−32卢比−/−（n=9）用高脂饮食喂养小鼠12周。A类，主动脉面部油红O染色的代表性图像。比例尺：0.5 cm。B类图A所示面部主动脉粥样硬化病变的量化，以病变占主动脉总面积的百分比表示。C类，主动脉根部代表性油红O染色。D类，通过测量油红O阳性区域量化主动脉根部病变。比例尺：500μm**P（P）与ApoE相比<0.01−/−组（n=8-9）。E-H公司，载脂蛋白E−/−（n=8）和ApoE−/−32卢比−/−（n=8）小鼠喂食一年。E类，主动脉面部油红O染色的代表性图像。比例尺：0.5 cm。F类，E面主动脉粥样硬化病变的量化，显示为病变相对于总主动脉面积的百分比。克，主动脉根部的代表性油红O染色。H（H），通过油红O阳性区域量化主动脉根部病变。比例尺：500μm**P（P）与ApoE相比<0.01−/−组（n=8）。
图3
图3。RGC-32缺乏抑制动脉粥样硬化病变中巨噬细胞的含量
阿波（ApoE）−/−（n=8）和ApoE−/−32卢比−/−（n=9）小鼠喂食高脂饮食（HFD）12周。A类，胶原含量的Masson染色和SMC含量（α-平滑肌肌动蛋白，α-SMA）或巨噬细胞积聚（CD68）的免疫组织化学染色的代表性图像。用相应的正常IgG染色作为阴性对照。比例尺：200μm。B类，定量分析胶原沉积、α-SMA-或CD68阳性面积和纤维帽厚度**P（P）与ApoE相比<0.01−/−组（n=8-9）。C类，ApoE主动脉根部CD68（红色，巨噬细胞）、Ki67（绿色）和4′，6-二氨基-2-苯基吲哚（DAPI，蓝色，细胞核）免疫荧光染色的代表性图像−/−（n=8）和ApoE−/−32卢比−/−（n=9）只小鼠喂食HFD 12周。用相应的正常IgG染色作为阴性对照。D类，定量C中CD68阳性细胞的Ki67染色，并显示为CD68阳性总细胞的百分比。比例尺：100μm。
图4
图4。常驻血管细胞RGC-32对动脉粥样硬化的发展至关重要
野生型（WT）（n=8）或Rgc32−/−（n=8）用WT小鼠的骨髓移植受体小鼠。然后，这些小鼠接受AAV-PCSK9单次注射，并喂食高脂肪饮食（HFD）12周。A类，主动脉面部油红O染色的代表性图像。比例尺：0.5 cm。B类图A所示面部主动脉粥样硬化病变的量化，以病变占主动脉总面积的百分比表示。C类，主动脉根部代表性油红O染色。比例尺：500μm。D类，通过测量油红O阳性区域量化主动脉根部病变**P（P）与WT组（n=8）相比，<0.01。E类，主动脉根部巨噬细胞聚集（CD68）免疫组织化学染色的代表性图像。比例尺：200μm。F类，CD68阳性区域的定量分析，如E所示**P（P）与WT组（n=8）相比，<0.01。
图5
图5。RGC-32对TNF-α诱导的内皮细胞ICAM-1和VCAM-1表达以及单核细胞与EC的相互作用至关重要
A-B公司野生型（WT）和Rgc32小鼠主动脉内皮细胞中ICAM-1、VCAM-1和p-选择素蛋白的表达−/−Western blot检测小鼠，并将其归一化为α-微管蛋白水平**P（P）与WT组（n=3）相比，P<0.01。C类-D类、ApoE主动脉根部内膜层ICAM-1和VCAM-1的代表性免疫组织化学染色和定量−/−（n=8）和ApoE−/−Rgc32型−/−（n=9）小鼠喂食高脂肪饮食（HFD）12周。用相应的正常IgG染色作为阴性对照**P（P）与ApoE相比<0.01−/−组（n=8-9）。比例尺：100μm。E类用Ad-GFP、Ad-shRGC32或Ad-RGC32转染HUVEC 24小时，然后转染ICAM-1或VCAM-1启动子构建物，并用载体或20 ng/ml TNF-α处理48小时。然后进行荧光素酶分析，荧光素素酶活性标准化为雷尼利亚活动**P（P）与Ad-GFP组相比<0.01；##P（P）与经TNF-α治疗的Ad-GFP组相比，<0.01；n=3。F-G公司、来自WT和Rgc32的原代小鼠主动脉内皮细胞−/−用载体或20 ng/ml的TNF-α治疗小鼠24小时。通过蛋白质印迹检测ICAM-1、VCAM-1和RGC-32蛋白的表达，并将其标准化为α-微管蛋白水平*P（P）<0.05, **P（P）与服用溶媒（−）的WT组相比，<0.01；##P（P）与接受TNF-α治疗的WT组相比，<0.01；n=6。H-I公司、WT和Rgc32−/−用载体或TNF-α处理原代小鼠主动脉EC单层24小时，然后用钙黄绿素标记（绿色）THP-1细胞孵育。经PBS洗涤后，计数10个随机区中粘附的THP-1细胞数*P（P）<0.05, **P（P）与服用溶媒（−）的WT组相比，<0.01；##P（P）与接受TNF-α治疗的WT组相比，<0.01；n=3。J-K公司用Ad-GFP、Ad-shRGC32或Ad-RGC32转导HUVEC 48小时，然后用CM-DiI-标记（红色）THP-1细胞培养。经PBS洗涤后，计数10个随机区中粘附的THP-1细胞数*P（P）<0.05, **P（P）与Ad-GFP组相比，<0.01（n=3）。比例尺：100μm。
图6
图6。RGC-32通过NF-κB信号转导介导内皮细胞ICAM-1和VCAM-1的表达
A-B公司，HUVEC用载体或25μM PDTC预处理，并用Ad-GFP或Ad-RGC32转导48小时。Western blot检测ICAM-1和VCAM-1蛋白表达，并将其归一化为α-微管蛋白水平。NF-κB p65的磷酸化被归一化为总NF-κ的B p65水平*P（P）<0.05, **P（P）与Ad-GFP组相比<0.01，##P（P）与单独的Ad-RGC32组相比，P<0.01。C类-H（H）用Ad-GFP、Ad-shRGC32或Ad-RGC32转导HUVEC 48小时，然后用载体或20 ng/ml TNF-α处理6小时。C类-D类如图所示，使用IgG、RGC-32或NF-κB p65抗体进行CoIP。免疫沉淀用NF-κB p65和RGC-32抗体进行免疫印迹（IB）。E类-H（H），采用ChIP分析检测NF-κB和RGC-32与ICAM-1的结合富集(E类和克)或VCAM-1(F类和H（H）)通过RT-PCR和qPCR测定*P（P）<0.05, **P（P）与Ad-GFP组相比<0.01，#P（P）<0.05,##P（P）与经TNF-α治疗的Ad-GFP组相比，<0.01。所有结果都代表了至少三个独立实验。
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    1. Moore KJ，Tabas I.巨噬细胞在动脉粥样硬化发病机制中的作用。单元格。2011;145:341–355.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Moore KJ、Sheedy FJ、Fisher EA。动脉粥样硬化中的巨噬细胞：动态平衡。Nat Rev免疫学。2013;13:709–721.-项目管理咨询公司-公共医学

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