A METTL3-METTL14 complex mediates mammalian nuclear RNA N6-adenosine methylation

doi:10.1038/nchembio.1432

.2014年2月；10(2):93-5.

doi:10.1038/nchembio.1432。 Epub 2013年12月6日。

METTL3-METTL14复合物介导哺乳动物核RNA N6-腺苷甲基化

刘建钊¹, 延安岳¹, 大理汉族², 小王², 叶甫², 梁张², 桂芳佳², 苗玉², 卢志科², 辛登², 清岱², 陈伟忠², 川河²

附属公司

¹1] 美国伊利诺伊州芝加哥市芝加哥大学化学系[2]美国伊利诺依州芝加哥市，芝加哥大学生物物理动力学研究所[3]。
²1] 美国伊利诺伊州芝加哥芝加哥大学化学系[2]美国伊利诺依州芝加哥芝加哥芝加哥大学生物物理动力学研究所。

PMID： 24316715
预防性维修识别码：项目经理3911877
内政部： 10.1038/nchembio.1432

METTL3-METTL14复合物介导哺乳动物核RNA N6-腺苷甲基化

刘建钊等。自然化学生物. 2014年2月.

.2014年2月；10(2):93-5.

doi:10.1038/nchembio.1432。 Epub 2013年12月6日。

作者

刘建照¹, 延安岳¹, 大理汉族², 小王², 叶甫², 梁张², 贾桂芳², 苗玉², 卢志科², 辛登², 清岱², 陈伟忠², 川河²

附属公司

¹1] 美国伊利诺伊州芝加哥市芝加哥大学化学系[2]美国伊利诺依州芝加哥市，芝加哥大学生物物理动力学研究所[3]。
²1] 美国伊利诺伊州芝加哥芝加哥大学化学系[2]美国伊利诺依州芝加哥芝加哥芝加哥大学生物物理动力学研究所。

PMID： 24316715
预防性维修识别码：项目经理3911877
内政部： 10.1038/nchembio.1432

摘要

N（6）-甲基腺苷（m（6）A）是哺乳动物信使和非编码RNA中最普遍和可逆的内部修饰。我们在这里报道了人类甲基转移酶样14（METTL14）催化m（6）A RNA甲基化。这两种蛋白与之前已知的唯一的m（6）A甲基转移酶METTL3一起，形成了稳定的METTL3-METTL14异二聚体核心复合物，在哺乳动物核RNA上的细胞m（6A）沉积中发挥作用。WTAP是一种哺乳动物剪接因子，可以与这种复合物相互作用并影响这种甲基化。

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数字

**图1。METTL3、METTL14和WTAP影响细胞膜⁶METTL3和METTL14形成稳定复合物的聚腺苷化RNA水平**
(一)m的LC-MS/MS定量⁶从HeLa和293FT分离的多聚腺苷化RNA中的A/A比率，对照组和单一敲除METTL3、METTL14或WTAP。两组数据均采用学生t检验进行评估*P（P）*值<1e-6（在对照和特定击倒样品之间计算）。误差线表示平均值±标准偏差(n个=10（对于HeLa），五个生物重复×两个技术重复，以及n个=293FT为8，四个生物重复×两个技术重复）。(b条)单个标记有Flag的METTL3、METTL14和WTAP的凝胶过滤痕迹，共同表达的Flag-METTL14/His₆-METTL3以及等摩尔量的混合Flag-METTL14/Flag-METTL3/Flag WTAP。所有蛋白均在昆虫细胞中表达，并通过Flag-IP纯化。标记物：669 kDa（牛甲状腺球蛋白）、200 kDa，（甘薯β-淀粉酶）和66 kDa。(**c（c）**)昆虫细胞共表达Flag-METTL14/His的Flag-IP产物的二维天然/SDS-PAGE考马斯染色₆-METTL3.~219 kDa的带对应于METTL3-14异二聚体，而~504 kDa带代表二聚体的二聚体。凝胶的完整图像如补充图15所示。

**图2。体外METTL3、METTL14和WTAP的甲基化活性**
这个*在体外*核糖核酸N个⁶-使用不同的RNA探针（编号1-6）检测标记METTL3、METTL14或WTAP的腺苷甲基化活性，在茎和/或环中有/没有GGACU的一致序列，在同位素标记辅因子的存在下有/没有茎环二级结构d日_三-SAM公司(*S公司*-（5′-腺苷）-L-蛋氨酸-d日_三). 甲基化产率根据d日_三-米⁶A到特定探针，通过LC-MS/MS测量。误差条表示平均值±标准偏差。，n个=4（两个生物重复×两个技术重复）。

**图3。核糖核酸N个₆-HeLa细胞核提取物METTL3-14复合物的腺苷甲基化及其RNA结合位点的鉴定**
(一)左侧面板：HeLa细胞核提取物的甲基化活性测试，根据补充图6a所示方案逐步分离。右侧面板：NE-A2凝胶过滤产物的甲基化活性。每个组分的相应蛋白质印迹显示在每个面板的底部。误差线表示平均值±标准偏差。，n个=2（两个生物重复）。凝胶的完整图像如补充图16所示。(b条)METTL3的4SU-PAR-CLIP结合位点中确定的共识基序(*P（P）*=1e-93），梅特尔14(*P（P）*=1e-47）和METTL3/METTL14覆盖层(*P（P）*=1e-79）。(**c（c）**)可逆甲基化的示意图N个⁶-RNA中的腺苷。METTL3和METTL14在细胞核内形成异二聚甲基转移酶复合物，执行RNA甲基化功能。WTAP与METTL3-14复合物相互作用，影响m⁶沉积。脱甲基酶去除m⁶一个标记，展示了一个可逆的过程。

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1. 贾庚，傅莹，何川。遗传学的发展趋势。2013;29:108–115.-项目管理咨询公司-公共医学
1. Motorin Y，Helm M.Wiley Interdiscip Rev RNA.2011；2:611–631.-公共医学
1. Beemon K，Keith J.《分子生物学》。1977;113:165–179.-公共医学
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[2] 日本博卡尔。甲基化核苷在真核生物mRNA中的生物合成和功能作用。摘自：Grosjean H，编辑。通过修改和编辑微调RNA功能。第12卷。Springer-Verlag；柏林-海德堡：2005年。第141-177页。

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