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.2014年1月16:96:253-62。
doi:10.1016/j.jprot.2013.11.014。 Epub 2013年11月22日。

酶辅助RP-RPLC法深入分析人肝磷酸蛋白质组

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临床试验

酶辅助RP-RPLC法深入分析人肝磷酸蛋白质组

杨阳边等。 蛋白质组学杂志. .

摘要

蛋白质磷酸化是最常见的翻译后修饰之一。它在调节肝组织的各种生物过程中起着关键作用。为了更好地了解蛋白质磷酸化在肝脏功能中的作用,对人类肝脏进行深入的磷酸化蛋白质组分析至关重要。在此,开发了一种酶辅助反相反相液相色谱(RP-RPLC)方法,该方法使用优化的酸性流动相操作两种RPLC分离。通过胰蛋白酶消化从第一次RPLC分离中收集的组分中Glu-C生成的肽,实现了高正交分离。通过使用两种类型的仪器,即TripleTOF 5600和LTQ Orbitrap Velos,进一步提高了磷酸蛋白质组的覆盖率。最终从正常人肝组织中鉴定出22446个磷酸化位点,对应6526个非冗余磷酸蛋白。在这些位点中,有15229个位点被确定为Ascore≥13。该数据集是人类肝脏最大的磷蛋白组数据集。它可以成为肝脏研究界的公共资源,并有望进行进一步的生物学研究。

生物学意义:酶辅助方法使两种RPLC分离都能在优化的酸性流动相下进行。TripleTOF 5600和Orbitrap Velos的标识具有高度互补性。生成了人类肝脏最大的磷酸蛋白质组数据集。

关键词:Glu-C消化;人肝磷蛋白组;LTQ Orbitrap Velos;质谱仪;RP-RPLC;三重TOF 5600。

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