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.2013年9月；33(18):3689-99.
doi:10.1128/MCB.00343-13。 Epub 2013年7月22日。

MicroRNA 329通过靶向CD146抑制血管生成

王平（Ping Wang） 1, 罗永廷, 段红霞, 舒兴, 张建林, 迪鲁, 景峰, 杨东陵, 丽娜·宋, 西云岩
附属公司

MicroRNA 329通过靶向CD146抑制血管生成

王平（Ping Wang）等。 分子细胞生物学. 2013年9月.

摘要

CD146是一种内皮生物标记物，在病理性血管生成过程中异常上调，并作为血管内皮生长因子受体2（VEGFR-2）的辅助受体促进疾病进展。然而，血管生成过程中CD146表达的调控机制尚不清楚。利用microRNA筛选方法，我们鉴定了一种新的血管生成负调控因子microRNA 329（miR-329），它直接靶向CD146并在体内外抑制CD146介导的血管生成。VEGF和肿瘤坏死因子α（TNF-α）下调内源性miR-329的表达，导致内皮细胞中CD146的升高。CD146的上调促进内皮细胞对VEGF诱导的SRC激酶家族（SKF）/p38丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）/NF-κB活化的反应，从而促进内皮细胞迁移和管形成。我们的动物实验表明，miR-329治疗可抑制血管上过度CD146的表达，并显著减弱病理性血管生成小鼠模型中的新生血管。我们的发现首次证明了血管生成中CD146的表达受miR-329的调节，并表明miR-328可能为血管生成性疾病的治疗提供潜在的治疗工具。

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数字

图1
图1
miR-329下调内皮细胞中的CD146。（A） 显示靶向CD146的microRNA预测的文氏图。将不同浓度的（B和C）miR-329转染人脐静脉内皮细胞，通过Western blotting（B）或定量实时PCR（C）检测CD146的表达水平。GAPDH起到了内部控制的作用。CD146 siRNA作为阳性对照。对于mRNA表达，首先将CD146标准化为GAPDH，并将表达水平与对照转染（miR-ctrl，设置为1）的表达水平进行比较。将（D和E）miR-329反义抑制剂（anti-miR-328）或对照抗-miRNA（anti-micr-ctrl）（50 nM）转染到HUVEC中。分别用Western blotting（D）和定量实时PCR（E）分析CD146的蛋白表达和mRNA表达。GAPDH被用作内部控制。mRNA表达的标准化与面板C相同。*，P（P）< 0.05; **,P（P）< 0.01; ***,P（P）< 0.001. 数据以三个独立实验的平均值±SD表示。
图2
图2
miR-329通过直接与CD146的3′UTR结合来靶向CD146。（A） miR-329与来自不同物种的CD146 3′UTR的序列比对：智人、泛长臂猿、猕猴和小家鼠。nt，核苷酸。（B） 荧光素酶分析在CD146 mRNA的3′UTR内确定了miR-329的结合位点。在293T细胞中与miR-328（50 nM）共转染后，分析了所示报告载体的荧光素酶活性。Luc-Mut-P4作为阳性对照。使用对照miRNA（miR-ctrl）转染的每个实验中的荧光素酶活性设置为1。Luc-empty，报告基因无3′UTR；Luc-3′UTR，野生型CD146′UTR报告基因；在各自miR-329结合位点的种子区域中具有不匹配的Luc-Mut-N1、Luc-Mut-N2、Luc-Mut-N3和Luc-Mut_N4、CD146 3′UTR；Luc-Mut-N14、CD146 3′UTR结合位点1和4均发生突变；Luc-Mut-P4、CD146 3′UTR，第四个结合位点与miR-329完全互补。（C） 在miR-329存在下，将含有CD146 3′UTR或CD146基因下游突变的3′UTR-（Mut-N14）的构建物转染293T细胞。GADPH充当内部控制。（D） HUVEC与抗miR-329（50 nM）和Luc-3′UTR或Luc-Mut-N14共同转染。检测报告基因的荧光素酶活性，并将其归一化为与对照抗miRNA（anti-miR-ctrl）共转染的Luc-empty的荧光素酶活性。挪威。，不显著；*或#，P（P）< 0.05; ##,P（P）< 0.01; ***,P（P）< 0.001. 误差条代表SD。数据代表三个独立实验。
图3
图3
miR-329被血管生成因子下调，导致CD146表达增加。（A和B）如图所示，HUVEC在VEGF（50 ng/ml）或TNF-α（50 ng/ml）的存在下培养，或与NF-κB通路抑制剂BAY11-7082（200 ng/ml）共培养。实时PCR检测内源性miR-329表达（A）和CD146（B）mRNA水平。U6或GAPDH分别充当内部控制。未经刺激的HUVEC正常表达设为1。（C） 在VEGF和TNF-α（各50 ng/ml）存在下，用miR-329（50 nM）转染HUVEC后，对CD146表达进行Western blot分析。CD146 siRNA作为阳性对照。GAPDH起到了内部控制的作用。（D） 对接受或未接受VEGF和TNF-α治疗的HUVEC进行ChIP（各50 ng/ml）。使用NF-κB p65抗体进行免疫沉淀，然后实时PCR扩增覆盖每个预测结合位点的基因组DNA片段。显示了miR-329转录起始位点的位点位置。NF-κB的富集被归一化为总输入对照。（E） 用抗miR-329（50 nM）转染HUVEC，并与VEGF和TNF-α（各50 ng/ml）或BAY11-7082（200 ng/ml）孵育。Western blotting分析CD146的表达。GAPDH被用作内部控制。*，P（P）< 0.05; **,P（P）< 0.01; ***,P（P）< 0.001. 条形图（平均值±SD）表示至少三个独立实验的标准化值。
图4
图4
miR-329通过靶向CD146抑制血管生成信号。（A至C）转染miR-329或与CD146 ORF（无3′UTR开放阅读框）共转染HUVEC后，通过Western blotting检测VEGF诱导的SRC激酶家族（SKF）（A）、p38（B）和NF-κB（NF-κ）p65磷酸化和IκBα降解）（C）的激活。总SKF、p38、GAPDH或p65用作内部控制。（D） 在转染miR-329或与CD146 ORF共转染的HUVEC中检测VEGF和TNF-α诱导的NF-κB活化。与C组一样进行正常化。（E）HUVEC在指定的处理下进行实时PCR，以分析促血管生成基因的mRNA水平。GAPDH被用作内部控制。未经刺激的每个实验中的mRNA水平设为1.*，P（P）< 0.05; **,P（P）< 0.01; ***,P（P）< 0.001. 误差条代表SD。数据代表三个实验。
图5
图5
miR-329抑制血管生成。（A） HUVEC转染抗miR-329抗体或与CD146 siRNA共转染后，使用Transwell系统测量HUVECs的迁移能力。迁移细胞通过Image J软件计数，如下图所示。（B） 在HUVEC转染抗miR-329抗体或与CD146 siRNA共转染后，分析试管形成。试管长度的量化由Image Pro Plus软件完成，如下图所示。用miR-329转染HUVEC或与CD146 ORF（无3′UTR的开放阅读框）共转染后，测量（C和D）VEGF-和TNF-α诱导的细胞迁移（C）或管形成（D）。从3个独立的分析中测量迁移细胞的数量或血管的长度。将含有转染抗miR-329（E）或miR-328（F）抗体的HUVEC的Matrigel塞植入SCID小鼠体内。用抗CD31抗体免疫染色后，分析外植体中的微血管形成。通过Image J软件量化Matrigel塞各部分的平均血管数(n个=5）。条形图代表50μ，P（P）< 0.05; **,P（P）< 0.01; ***,P（P）< 0.001. 误差条代表SD。数据代表至少三个实验。
图6
图6
miR-329在OIR小鼠模型中抑制视网膜新生血管。（A） OIR诱导和miR-329注射的示意图。在出生后第12天（P12），将改良miR-329、对照miRNA（miR-ctrl）（分别为5μg）或对照溶液（0.9%NaCl）玻璃体内注射到OIR小鼠体内。在P17处收集视网膜样本，进行RNA分离、平贴染色和免疫组织化学分析。（B） 实时PCR分析P12和P17时正常或OIR小鼠视网膜内源性CD146和miR-329表达。GAPDH或U6被用作内部控制。CD146/GAPDH或miR-329/U6在P12时正常化为正常视网膜(n个=8至14）。（C） 在P17测量正常视网膜和用对照溶液、对照miRNA或miR-329（5μg）处理的OIR视网膜中内皮CD146的表达。使用Image Pro Plus软件分析E面板共焦图像中CD146/CD31的相对荧光密度(n个=5）。（D） 用FITC-右旋糖酐灌注指定治疗的扁平安装视网膜，并通过荧光显微镜观察以评估P17处的视网膜血管系统（绿色）。对图像进行处理，并使用Adobe PhotoShop 7.0软件添加血管硬化（VO）区域（黄色）和新生血管（NV）区域（红色）。VO或NV与视网膜总面积的比值已量化，如下图所示(n个= 8). 条形代表500μm。（E和F）用免疫荧光法分析正常或OIR小鼠视网膜的血管化情况。血管染色采用抗CD146抗体（红色）和抗CD31抗体（绿色）。细胞核用DAPI（蓝色）染色。定量视网膜内（神经节细胞层[GCL]和内核层[INL]）（E）中的血管数量，以及向玻璃体腔（F）迁移的血管数量（CD31阳性），并在直方图中显示（每组9至14只小鼠）。箭头显示纵向和横向畸变微血管。VC，玻璃体腔。条形代表50μm。挪威。，不重要，*，P（P）< 0.05; **,P（P）< 0.01; ***,P（P）< 0.001. 误差条代表SD。数据代表至少三个实验。
图7
图7
miR-329在血管生成中作用的示意模型。VEGF与VEGFR-2的结合激活NF-κB信号，导致内皮细胞中miR-329的下调。miR-329表达减少导致CD146水平升高，CD146是VEGFR-2的促血管生成效应器和辅助受体。因此，miR-329通过靶向CD146发挥血管生成抑制剂的作用。
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    1. Griffoen AW，Molema G.2000。血管生成：药物干预治疗癌症、心血管疾病和慢性炎症的潜力。药理学。版次52:237–268-公共医学

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