跳到主页面内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https系统

该站点是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2011年12月2日；286(48):41758-41766.
doi:10.1074/jbc。M111.271080。 Epub 2011年9月29日。

hSWS1·SWSAP1是一种进化上保守的复合物，需要有效的同源重组修复

刘婷 1, 李婉 1, 岳武 1, 陈俊杰 2, 黄军（Jun Huang） 三
附属公司

hSWS1·SWSAP1是一种进化上保守的复合物，需要有效的同源重组修复

刘婷等。 生物化学杂志. .

摘要

酵母中的舒复合体在同源重组途径中起着重要作用，对维持基因组完整性至关重要。将人SWS1（hSWS1）鉴定为芽殖酵母Shu2的同源物，表明Shu复合体在进化上是保守的。然而，该复合体中其他成分的人体对应物尚未确定和表征。在这里，我们描述了这种复合物的一种新的人类成分SWSAP1（hSWS1-associated protein 1）/C19orf39的特征。我们证明hSWS1和SWSAP1在体内和体外形成稳定的复合物。hSWS1和SWSAP1因其稳定性而相互依存。我们进一步证明纯化的hSWS1·SWSAP1复合物具有单链DNA结合活性和DNA刺激的ATP酶活性。此外，SWSAP1与RAD51和RAD51平行记录相互作用，SWSAP2缺失导致同源重组修复缺陷。因此，我们的结果表明人类舒复合体（hSWS1·SWSAP1）在同源重组中具有进化保守功能。

PubMed免责声明

数字

图1。
图1。
SWSAP1作为hSWS1-结合蛋白的鉴定。 一用稳定表达SFB-tag（S-tag、FLAG表位标签和链霉亲和素结合肽标签）hSWS1的293T细胞对染色质组分分离的蛋白复合物进行串联亲和纯化。桌子是通过质谱分析鉴定的蛋白质的摘要。信件在里面大胆的指示诱饵蛋白质。b条，将人类SWSAP1与溶血隐球菌半径。指出了保守的Walker A和Walker B基序。c（c），裂变酵母Rlp1、Rdl1和人类SWSAP1的示意图。d日和e（电子），通过免疫共沉淀证实了hSWS1和SWSAP1之间的相互作用(IP（IP）)实验。用编码Myc标记的hSWS1或SWSAP1的质粒以及编码SFB标记的SWSAP1或hSWS1的质粒转染293T细胞。转染24小时后收集细胞。使用S珠进行沉淀反应，并使用所示抗体进行免疫印迹。（f），内源性hSWS1和SWSAP1形成复合物体内HeLa细胞被模拟处理或用MMS处理。用抗hSWS1抗体免疫印迹对照或抗SWSAP1免疫沉淀物(顶部). 使用抗hSWS1和抗SWSAP1抗体的免疫印迹法显示内源性蛋白的表达水平(底部).克和小时，hSWS1和SWSAP1直接相互绑定。SF9细胞与表达GST标记的hSWS1或SWSAP1的杆状病毒以及表达SFB标记的SWSAP1或hSWS1。如图所示，进行了下拉实验和免疫印迹。我如“实验程序”所述，用凝胶过滤色谱法研究异二聚体复合物的形成。用12.5%SDS-PAGE分析峰组分的等分，并用Western blot分析证实。
图2。
图2。
hSWS1和SWSAP1因其稳定性而相互依存。 a–c，本研究中使用的人类SWS1和SWSAP1及其缺失突变体的示意图。b–d段，映射hSWS1-SWSAP1交互所需的相应区域。使用S珠进行沉淀反应，并使用所示抗体进行免疫印迹。e（电子）和（f）hSWS1或SWSAP1的缺失会导致细胞中这两种蛋白质的丢失。用对照siRNA或特异性靶向hSWS1或SWSAP1的siRNA转染HeLa细胞。使用识别hSWS1、SWSAP1或GAPDH的抗体通过免疫印迹分析裂解产物。
图3。
图3。
SWSAP1是一种DNA刺激的ATP酶，优先结合单链DNA。 一，SWSAP1和hSWS1·SWSAP1-复合物ATP酶活性的时间进程。如“实验程序”所述，在含有或不含有ssDNA的情况下培养SWSAP1、hSWS1·SWSAP1-复合物或SWSAP1-ATP酶失活突变体b条如“实验程序”所述，用5′-生物素标记的ssDNA或dsDNA孵育hSWS1、SWSAP1、hSWS1·SWSAP1-复合物和SWSAP1-ATP酶失活突变体的浓度增加。蛋白质·DNA复合物和未结合DNA显示在正确的.
图4。
图4。
SWSAP1与RAD51和RAD51并行记录相互作用，并参与同源重组修复。 一hSWS1或SWSAP1下调的细胞显示MMS增加，但CPT敏感性没有增加。按照“实验程序”进行细胞存活分析。数据以平均值±标准偏差表示(误差线)来自三个不同的实验。b条，HR分析示意图。DR-GFP构建体由两个突变的GFP基因（SceGFP和截短的iGFP）的直接重复组成。当I-Sce1产生的单双链DNA断裂通过用iGFP的基因转化修复时，GFP的表达恢复，并且可以通过FACS分析来测量。c（c），hSWS1或SWSAP1表达降低会损害HR修复。用pCBASce质粒电穿孔U2OS DR-GFP细胞（详见“实验程序”）。电穿孔48小时后用流式细胞仪测定GFP阳性细胞的百分比。将数据归一化为从转染对照siRNA的细胞中获得的数据（设置为1.0）。平均值±S.E(误差线)所示为三个独立实验得出的结果。d日和e（电子）hSWS1或SWSAP1下调会损害MMS诱导的RAD51病灶形成。在MMS治疗6小时后，使用所示抗体进行免疫染色。典型的RAD51焦点如所示d日数据表示为平均值±S.D(误差线)从三个不同的实验中，每个实验中统计了100多个细胞(e（电子）).（f）免疫印迹法证实了敲除效率。克，SWSAP1与RAD51和几个RAD51 Paralog交互，但不与XRCC2交互体内用编码SFB标记的SWSAP1的质粒以及编码Myc-tagged RAD51或RAD51副序列的质粒转染.293T细胞。转染24小时后收集细胞。使用S珠进行沉淀反应，并使用所示抗体进行免疫印迹。小时，SWSAP1与RAD51和几个RAD51 Paralog交互，但不与XRCC2交互在体外SF9细胞与表达GST标记的RAD51或RAD51副产物的杆状病毒以及表达SFB标记的SWSAP1的杆状细胞病毒共同感染。如图所示，进行了下拉实验和免疫印迹。我，SWSAP1的ATP酶活性是恢复细胞对MMS抵抗所必需的。生成了稳定表达SWSAP1的siRNA-resistant HA-FLAG-tagged WT（SWSAP1SiR-WT）、K18A突变体（SWSAP2SiR-KA）和D96A突变体的HeLa衍生细胞系。按照“实验程序”进行细胞存活分析。数据以平均值±标准偏差表示(误差线)来自三个不同的实验。j个，SWSAP1的ATP酶活性是其促进RAD51病灶形成的功能所必需的。在MMS治疗6小时后，使用指定的抗体进行免疫染色。数据表示为平均值±S.D(误差线)从三个不同的实验中，每个实验都统计了100多个细胞。k个，利用FLAG抗体通过免疫印迹法确认SWSAP1的表达，并从转染SWSAP1-siRNA#2的细胞制备提取物。
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

  • 舒复合体在同源重组中功能作用的结构基础。
    张S、王莉、陶毅、白涛、卢锐、张涛、陈杰、丁杰。 张S等。 核酸研究2017年12月15日；45(22):13068-13079. doi:10.1093/nar/gkx992。 2017年核酸研究。 PMID：29069504 免费PMC文章。
  • 人舒复合体与PDS5B和SPIDR共同促进同源重组。
    Martino J、Brunette GJ、Barroso-González J、Moiseeva TN、Smith CM、Bakkenist CJ、O'Sullivan RJ、Bernstein KA。 Martino J等人。 核酸研究2019年11月4日；47（19）：10151-10165。doi:10.1093/nar/gkz738。 2019年核酸研究。 PMID：31665741 免费PMC文章。
  • 由SWS1-SWSAP1-SPIDR复合物控制的同源重组的不同途径。
    Prakash R、Sandoval T、Morati F、Zagelbaum JA、Lim PX、White T、Taylor B、Wang R、Desclos ECB、Sullivan MR、Rein HL、Bernstein KA、Krawczyk PM、Gautier J、Modesti M、Vanoli F、Jasin M。 Prakash R等人。 国家公社。2021年7月12日；12(1):4255. doi:10.1038/s41467-021-24205-6。 国家公社。2021 PMID：34253720 免费PMC文章。
  • 人类RAD51蛋白在同源重组和双链断裂修复中的作用。
    Baumann P，西南卡罗来纳州。 Baumann P等人。 生物化学科学趋势。1998年7月；23(7):247-51. doi:10.1016/s0968-0004（98）01232-8。 生物化学科学趋势。1998 PMID：9697414 审查。
  • 对同源重组和DNA复制期间RAD51活性和调节的新见解。
    Godin SK、Sullivan MR、Bernstein KA。 Godin SK等人。 生物化学细胞生物学。2016年10月；94(5):407-418. doi:10.1139/bcb-2016-0012。Epub 2016年3月31日。 生物化学细胞生物学。2016 PMID：27224545 免费PMC文章。 审查。
查看所有类似文章

引用人

查看所有“被引用”文章

工具书类

    1. van Gent D.C.、Hoeijmakers J.H.、Kanaar R.（2001）《自然评论》。2, 196–206-公共医学
    1. Branzei D.、Foiani M.（2008）《分子细胞生物学自然评论》。9, 297–308-公共医学
    1. Moynahan M.E.、Jasin M.（2010）《分子细胞生物学自然评论》。11, 196–207-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Weinstock D.M.，Richardson C.A.，Elliott B.，Jasin M.（2006）DNA修复（Amst.）5，1065–1074-公共医学
    1. Lukas J.、Bartek J.（2004）《细胞》118、666–668-公共医学

出版物类型