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.2009年9月22日；106(38):16157-62.
doi:10.1073/pnas.0908201106。 Epub 2009年9月2日。

C-末端规则肽介导依赖于神经素-1的细胞、血管和组织渗透

坦贝特·蒂萨鲁 1, Kazuki N Sugahara公司, 文卡塔·拉马纳·科塔姆拉朱, 埃尔基·若斯拉赫蒂
附属公司

C-末端规则肽介导依赖于神经素-1的细胞、血管和组织渗透

坦贝特·蒂萨鲁等。 美国国家科学院程序. .

摘要

筛选表达与前列腺癌细胞结合的随机肽的噬菌体文库，主要产生具有C末端精氨酸（或很少赖氨酸）残基的肽，通常在R/KXXR/K的一致上下文中。表达这些序列的噬菌体和用它们包被的合成纳米颗粒结合并内化到细胞中。C末端精氨酸（或赖氨酸）对活性至关重要；添加另一种氨基酸，甚至通过酰胺化阻断精氨酸残基的自由羧基，消除了结合和内化活性。内部R/KXXR/K可以通过蛋白酶的切割暴露并打开。对基序C端曝光的严格要求促使我们将这种现象称为C端规则（CendR）。亲和层析显示，CendR肽与靶细胞上的神经胶质蛋白-1（NRP-1）结合。NRP-1是一种细胞表面受体，在血管生成、血管通透性调节和神经系统发育中发挥重要作用。VEGF-A165和NRP-1的其他配体具有C末端CendR序列，该序列与NRP-1 b1结构域相互作用，导致细胞内吞和血管渗漏。我们的CendR肽具有类似的效果，特别是当通过与一个粒子偶联而产生多价时。我们还注意到这些肽的一种独特而重要的活性：通过组织的渗透和运输。这些肽能够将纳米粒子大小的有效载荷深入血管外组织。我们的观察结果对药物输送和组织屏障和肿瘤的渗透具有指导意义。

PubMed免责声明

利益冲突声明

作者声明没有利益冲突。

数字

图1。
图1。
RPARPAR噬菌体与培养的PPC-1细胞的相互作用。(A类)细胞在4°C下与噬菌体孵育以评估表面结合，或在37°C下孵育，然后在低pH值下清洗以评估噬菌体内化。RPARPAR功能化qdots抑制RPARPAR噬菌体的结合和内化，而G7 qdots则无作用。GGGGG R（G6R）噬菌体的内化程度最低。过量的RPARPAR qdots阻断了G6R噬菌体与PPC-1细胞的结合。结合表达为折叠对照G7噬菌体。统计分析由Student’st吨测试。n个= 3; 误差条表示SEM；*，P<0.05；**，P<0.01。(B类)37°C下用噬菌体展示RPARPAR或G7孵育2 h的PPC-1细胞的共焦显微图像(插入)肽。用抗T7噬菌体多克隆抗体染色检测噬菌体。绿色，噬菌体；蓝色，DAPI。（比例尺，20μm）
图2。
图2。
CendR肽的蛋白水解激活。(A类)通过胰蛋白酶消化激活隐秘RPARPARA肽的方案。胰蛋白酶在碱性氨基酸后裂解，以暴露C末端精氨酸残基。(B类)胰蛋白酶处理可增强RPARPARA噬菌体的结合。采用方差分析进行统计分析；n个=3；误差条表示SEM；*，P<0.05；**，P<0.01。
图3。
图3。
(A类)循环20分钟后静脉注射RPARPAR噬菌体的组织分布。RPARPAR噬菌体的滴度表示为折叠对照G7噬菌体。统计分析由Student’st吨测试。n个= 3; 误差条表示SEM；**，P<0.01；***，P<0.001。(B类)静脉注射RPARPAR或G7的小鼠肺切片中噬菌体（绿色）的免疫荧光定位(插入)噬菌体。RPARPAR噬菌体在肺组织中显示出广泛的噬菌体免疫反应性，而未检测到对照G7噬菌体。（比例尺，50μm）
图4。
图4。
NRP-1作为CendR受体的鉴定和验证。(A类)与RPARPAR肽相互作用的蛋白质亲和层析。用200 mM吡喃葡萄糖苷缓冲液提取PPC-1肿瘤组织，用RPARPAR肽包被珠培养提取物，然后用2 mM游离RPARPAR肽进行广泛洗涤和洗脱。顶部：一种银色凝胶。用游离RPARPAR肽洗脱后，注意出现130-kDa条带。底部：带有抗NRP-1抗体的免疫印迹。(B类)RPARPAR噬菌体与野生型NRP-1（NRP-1）、三突变型NS346A-E348A-T349A NRP-1或亲本pcDNA3.1质粒（载体）瞬时转染的M21黑色素瘤细胞的结合，以及与未转染M21细胞的结合。采用方差分析进行统计分析；n个= 3; 误差条表示SEM；***，P<0.001。(C类)将RPARPAR噬菌体内化到瞬时转染NRP-1的M21细胞中。RPARPAR噬菌体(左侧)或RPARPARA噬菌体(赖特)与细胞在37°C下孵育3小时。RPARPAR噬菌体被内化为表达NRP-1的细胞(左侧，箭头），但不进入NRP-1阴性细胞(左侧，星号）。RPARPARA噬菌体未内化入NRP-1阳性M21细胞(赖特). (D类)37°C下与噬菌体孵育3h的PPC-1细胞中NRP-1和RPARPAR噬菌体的共聚焦免疫荧光图像(C类和D类)绿色，NRP-1；红色，噬菌体；蓝色，DAPI。（比例尺，10μm）
图5。
图5。
噬菌体展示NRP-1配体肽与PPC-1细胞的结合。(A类)显示VEGF-C7的C末端7 aa的噬菌体与PPC1细胞结合；在肽（VEGF-C7-a）中添加C末端丙氨酸可消除这种结合。统计分析由Student’st吨测试。n个= 3; 误差条表示SEM；***，P<0.001。(B类和C类)PPC1细胞中的噬菌体免疫反应。细胞在109表达指示肽的噬菌体的pfu，用抗T7抗体（红色）染色，并通过共聚焦显微镜检查。细胞核用DAPI（蓝色）染色。插图：0.5 mM游离RPARPAR肽与噬菌体结合的竞争（添加噬菌体前10分钟添加到细胞中）。（比例尺，20μm）
图6。
图6。
多重CendR肽会导致血管泄漏和组织渗透。(A类)Miles分析：小鼠皮肤样品中埃文斯蓝渗漏的宏观表现，预先皮内注射含有山羊IgG（左栏）或抗NRP-1中和抗体（右栏）的PBS，20分钟后注射含有50 ng VEGF-165、多聚RPARPAR（qdot支架；肽浓度，8μM）的PBS，多元G7肽（qdot支架；肽浓度，1.2μM）或仅PBS（无）。(B类)皮肤样本中荧光素酶血管渗漏的定量。作为对照，VEGF注射皮肤中的荧光素酶活性设置为1。(C类)皮肤样本中示踪噬菌体血管渗漏的定量。作为对照，VEGF注射皮肤中的噬菌体滴度设置为1。统计分析由Student’st吨测试；n个= 4; 误差条表示SEM；**，P<0.01；***，P<0.001。(D类)噬菌体免疫反应（绿色）和血管（CD31染色；红色）的共焦显微镜显示，注射多聚体RPARPAR而非G7的小鼠的噬菌体渗入皮肤(插入).
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    1. Elliott G，O’Hare P.疱疹病毒结构蛋白的细胞间转运和蛋白质传递。单元格。1997;88:223–233.-公共医学
    1. Green M，Loewenstein PM。化学合成的人类免疫缺陷病毒tat反激活蛋白的自主功能域。单元格。1988;55:1179–1188.-公共医学
    1. Frankel AD，Pabo CO.人体免疫缺陷病毒tat蛋白的细胞摄取。单元格。1988;55:1189–1193.-公共医学
    1. 兰格尔大学。细胞穿透肽手册。博卡拉顿：CRC/Taylor&Francis；2007

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