Proteomic analysis of human parotid gland exosomes by multidimensional protein identification technology (MudPIT)

doi:10.1021/pr800658c

.2009年3月；8(3):1304-14.

doi:10.1021/pr800658c。

用多维蛋白质鉴定技术（MudPIT）对人腮腺外泌体进行蛋白质组学分析

米雷娅·冈萨雷斯-贝涅¹, 陆炳文, 韩雪梅, 弗雷德·哈根, 亚瑟·R·汉德, 詹姆斯·梅尔文, 约翰·耶茨

附属公司

PMID： 19199708
预防性维修识别码： PMC2693447型
内政部： 10.1021/pr800658c

用多维蛋白质鉴定技术（MudPIT）对人腮腺外泌体进行蛋白质组学分析

米雷娅·冈萨雷斯-贝涅等。蛋白组学研究杂志. 2009年3月.

.2009年3月；8(3):1304-14.

doi:10.1021/pr800658c。

作者

米雷娅·冈萨雷斯-贝涅¹, 陆炳文, 韩雪梅, 弗雷德·哈根, 亚瑟·R·汉德, 詹姆斯·梅尔文, 约翰·耶茨

附属

¹美国罗切斯特大学医学中心口腔生物学中心，罗切斯特，纽约14642。

PMID： 19199708
预防性维修识别码： PMC2693447型
内政部： 10.1021/pr800658c

摘要

人类导管唾液为整个口腔液提供了一千多种独特的蛋白质。唾液腺分泌这些蛋白质的大部分机制尚待确定。本研究使用了基于质谱的鸟枪蛋白质组学方法来探索唾液中发现的蛋白质亚群来源于外泌体的可能性，外泌体是多泡内泌体中起源于内泌体的膜结合囊泡。利用MudPIT（多维蛋白质鉴定技术）质谱，我们对人类腮腺唾液外体部分的491个蛋白质进行了分类。其中许多蛋白质以前在腮腺导管唾液中观察到（265个蛋白质）。此外，腮腺外泌体中的72种蛋白质与先前确定的尿外泌物蛋白质重叠，这些蛋白质也经常与其他组织和细胞类型的外泌体相关联。基因本体论（GO）和KEGG通路分析发现，细胞溶质蛋白构成腮腺外泌体中最大的蛋白质类（43%），参与磷脂酰肌醇信号系统、钙信号通路、肌醇代谢、蛋白质输出和信号转导等过程；而完整的质膜蛋白和相关/外周质膜蛋白（26%）与细胞外基质受体相互作用、上皮细胞信号、T细胞和B细胞受体信号、细胞因子受体相互作用以及抗原处理和呈递等生物功能相关。此外，这些推测的唾液外体蛋白与特定疾病有关（例如，神经退行性疾病、朊病毒病、癌症、I型和II型糖尿病）。因此，腮腺分泌外泌体，反映腺体的代谢和功能状态，并可能携带有用的信息蛋白标记物，用于诊断和治疗系统性疾病。

PubMed免责声明

数字

**图1。腮腺外体蛋白的亚细胞定位注释**
使用UniProtKB进行蛋白质分类/瑞士Prot、息税前利润和UniProtKB/TrEMBL数据库。大多数外体蛋白被分配到细胞溶质室，而最小数量被确定为假设。

**图2。使用UniProtKB/Swiss-Prot、EBI和UniProtKB/TrEMBL数据库的蛋白质注释**
**A.确定的腮腺外泌体完整质膜蛋白的功能注释。**所鉴定的蛋白质中有22%为受体，少数（2%）为泵蛋白和/或钙结合/离子转运蛋白。**B.确定的腮腺外体外周膜蛋白的功能注释。**腮腺外体蛋白的大部分与信号通路中的蛋白质相关，而较少的蛋白质与离子结合/转运和肌动蛋白结合活性相关。**C.确定的腮腺外体细胞溶质蛋白的功能注释。**34%的胞浆蛋白与催化活性有关，而只有0.5%与蛋白酶抑制剂活性有关。

**图3。腮腺外体蛋白的基因本体注释**
**A.通过生物过程进行GO注释。**通过生物过程分配腮腺外泌体蛋白质表明，这些蛋白质中分配给细胞过程的最多（261），分配给细胞杀伤的最少（1）。**B.通过蜂窝组件进行GO注释。**根据细胞成分对腮腺外体蛋白的分配表明，大多数属于细胞部分和细胞（各306个），而少数位于包膜（7）中。**C.通过分子功能进行GO注释。**根据分子功能对腮腺外泌体蛋白质的分配证实，蛋白质数量最多（311）与结合活性相关，最低（1个）与辅助转运蛋白活性和伴侣调节活性相关。

**图4。腮腺外体和腮腺唾液蛋白质组的比较**
**A.显示腮腺外体和腮腺唾液蛋白质组之间蛋白质重叠的维恩图。**23%的蛋白质存在于这两种蛋白质组中，20%是独特的腮腺外体蛋白，57%是腮腺唾液特有的。**B.维恩图显示了来自同一供体的腮腺外体和腮腺唾液蛋白质组之间的蛋白质重叠。**在这两种蛋白质组中都发现了25%的蛋白质，而27%是独特的腮腺外体蛋白质，48%是腮腺唾液特有的。

**图5。腮腺外泌体的免疫电镜观察**
**答：。**腮腺外泌体的电子显微镜。左侧面板，钼酸铵阴性染色；右图，用抗TSG101（50μg/ml）进行免疫金标记。箭头表示标记的外显子。B。腮腺外泌体直径的频率分布。共测量了318个外泌体。

**图6。人腮腺唾液中腮腺外体蛋白的Western blot分析**
**面板A：**使用来自Abcam（马萨诸塞州剑桥）的抗AIP1/Alix多克隆抗体检测AIP1/Aalix腮腺外体蛋白（n=3）。该蛋白的预期分子量约为105 kDa。**B组：**用Anil Menon博士（俄亥俄州辛辛那提大学分子遗传学、生物化学和微生物学系）善意提供的多克隆抗体检测水通道蛋白-5腮腺外体蛋白（n=3）。该抗体可识别约27kDa的蛋白质。**面板C：**TAPA1/CD81和**面板D：**使用来自Abcam（马萨诸塞州坎布里奇）的单克隆抗体检测参与生物生成过程的CD63（非还原状态）腮腺异体蛋白。这些蛋白质的相应分子量分别为~26 kDa和~47 kDa。

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