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.2008年7月3日;454(7200):56-61.
doi:10.1038/nature07086。 Epub 2008年6月11日。

SMAD蛋白控制DROSHA介导的microRNA成熟

附属公司

SMAD蛋白控制DROSHA介导的microRNA成熟

布兰迪·戴维斯等。 自然. .

摘要

微RNA(miRNAs)是一种小的非编码RNA,参与信使RNA和蛋白质合成的时空调控。miRNA异常表达导致发育异常和疾病,如心血管疾病和癌症;然而,调节miRNA生物发生的刺激物和过程基本上是未知的。转化生长因子β(TGF-β)和骨形态发生蛋白(BMP)家族的生长因子在发育和成人组织(包括血管系统)内稳态中协调基本的生物过程。在这里,我们表明TGF-β和BMPs诱导人血管平滑肌细胞收缩表型是由miR-21介导的。miR-21下调PDCD4(程序性细胞死亡4),PDCD4反过来作为平滑肌收缩基因的负调控因子。令人惊讶的是,TGF-β和BMP信号通过转录后步骤促进成熟miR-21表达的快速增加,促进DROSHA(也称为RNASEN)复合物将miR-21(pri-miR-21)的初级转录物加工成前体miR-21。TGF-β和BMP特异性SMAD信号传感器被招募到带有RNA解旋酶p68(也称为DDX5)的复合物中的pri-miR-21,该复合物是DROSHA微处理器复合物的组成部分。此过程不需要共享辅助因子SMAD4。因此,配体特异性SMAD蛋白对miRNA生物生成的调控对于血管平滑肌细胞表型的控制以及TGF-β和BMP信号通路介导的SMAD4诱导的依赖性反应至关重要。

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数字

图1
图1。miR-21对BMP调节VSMC表型至关重要
用BMP4处理24 h的PASMCs中miRNA表达水平归一化为U6小核RNA(snRNA)(*P(P)< 0.05,n个= 4).b条,用反义RNA寡核苷酸转染PASMCs以对抗不同的miRNAs或GFP(对照)。BMP4处理48小时后,用抗SMA抗体(绿色)和4,6-二氨基-2-苯基吲哚(DAPI;蓝色)对细胞进行染色。c(c)PASMCs感染了携带CMV-driven GFP(对照;Ad-GFP)、miR-21(Ad-miR-21)或miR-125b(Ad-mi R-125b)的腺病毒。BMP4治疗后(48小时)测量SMA mRNA水平(*P(P)< 0.05,n个= 4).,用载体(模拟)或人转染10T1/2细胞PDCD4(PDCD4)cDNA构建体,然后进行BMP4处理(24小时)。的表达式Sma公司、钙调素、,第22页α,识别码3或人类PDCD4(PDCD4)相对于GAPDH公司mRNA显示(*P(P)< 0.001,n个= 3).e(电子),PASMCs转染对照siRNA(control-siRNA)或siRNAPDCD4(PDCD4)(PDCD4(PDCD4)-siRNA)。相对mRNA表达如所示。误差条代表s.e.m。
图2
图2。TGF-β对miR-21生物合成的转录后调控
BMP4或TGF-β刺激的PASMCs中成熟miR-21和miR-199a的表达归一化为U6 snRNA(24 h*P(P)< 0.05;n个= 3).b条在BMP4(上面板)或TGF-β(下面板)刺激下PASMCs中pri-miR-21、pre-miR-21或成熟miR-21表达的时间进程。c(c),用BMP4(5 h)刺激经α-阿马尼汀预处理的PASMC。pri-miR-21、前miR-21和成熟miR-21的表达或标识1显示了(*P(P)< 0.05;n个= 3).、转染到10T1/2细胞的人miR-21表达结构(pCMV-miR-21)数量增加后,pri-miR-21、前miR-21和成熟miR-21的相对表达(*P(P)< 0.05;n个= 3). 误差条代表标准误差。
图3
图3。SMAD与DROSHA复合物成分p68的相互作用
,PASMCs转染对照siRNA(control-siRNA)或siRNA混合物SMAD1系列座椅模块组件5(小型计算机-siRNA)。BMP4治疗(2 h)后,比较pri-miR-21、pre-miR-2 1和成熟miR-2 1的表达(顶面板)。作为控件ID3、SMAD1、SMAD5座椅模块组件如图所示(底部面板)。NS,不显著(P>0.05)。b条,PASMCs转染对照siRNA(control-siRNA)或siRNA第68页(第68页-siRNA)。在BMP4治疗后(2 h)检测pri-miR-21、pre-miR-二十一和成熟miR-21的表达(*P(P)< 0.05;n个= 3).c(c),用BMP4处理的PASMC制备的核提取物(2 h),用抗p68、抗DROSHA抗体或非特异性IgG(对照)进行免疫沉淀,然后用抗SMAD1/5、抗p68或抗DROSHA抗体进行免疫染色。核提取物用抗层粘连A/C抗体进行免疫染色(对照)。IB,免疫印迹;误差线代表标准误差。
图4
图4。SMADs与pri-miRNA的结合促进DROSHA的加工
,Cos7细胞转染pCMV-miR-21和Flag–SMAD1、Flag-SMAD3或Flag-SMAD2,然后进行BMP4或TGF-β治疗(2 h)。用抗Flag抗体或非特异性IgG(对照)进行RNA-ChIP,然后用miR-21引物进行PCR扩增(*P(P)<0.05,与未治疗相比;n个= 4). IP,免疫沉淀。b条,用BMP4或TGF-β治疗PASMCs后(1 h),内源性SMAD1/SMAD5、SMAD2/SMAD3,第68页德罗莎免疫沉淀,并用miR-21、miR-199a或miR-214引物进行PCR分析。作为对照,未经逆转录酶(–RT)处理的RNA样本或经非特异性免疫沉淀的RNA样本免疫球蛋白G(免疫球蛋白G)进行PCR(*P(P)<0.05与无相比;n个= 4).c(c),体外通过将pri-miR-21底物与用载体、BMP4或TGF-β处理的Cos7细胞制备的核提取物孵育(2 h)来进行pri-miRNA处理分析。nt,核苷酸;误差线代表标准误差。
图5
图5。SMAD4诱导pri-miRNA成熟的依赖机制
、pri-miR-21、pre-miR-二十一和成熟miR-21的表达水平或座椅模块组件4转染对照siRNA(control-siRNA)或座椅模块组件4小干扰RNA(座椅模块组件4-siRNA)。b条、pri-miR-21、pre-miR-二十一和成熟miR-21的表达水平或PAI-1型在人体内座椅模块组件4-TGF-β刺激阴性乳腺癌MDA-MB-468细胞0.5小时(*P(P)< 0.05;n个= 3).c(c)在RNA-ChIP前1 h用TGF-β处理MDA-MB-468细胞。用抗SMAD1/SMAD5、抗SMAD2/SMAD3或抗DROSHA抗体沉淀内源性蛋白,然后用miR-21引物进行PCR分析(*P(P)<0.05,与无相比;n个= 3).在TGF-β治疗前(1 h),MDA-MB-468细胞被携带显性阴性Ⅰ型TGF-α受体(dnALK5)的腺病毒感染,该受体是TGF-γ信号的抑制剂。检测pri-miR-21、前miR-21和成熟miR-21的数量(*P(P)<0.05,与无相比;n个= 3). 误差条代表标准误差。

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    1. 10 Dijke P,Arthur HM.血管发育和疾病中TGFβ信号的细胞外控制。《自然》杂志分子细胞生物学版。2007;8:857–868.-公共医学
    1. 莫雷尔西北。BMPR2突变导致的肺动脉高压:组织重塑的新范式?程序。美国胸科。Soc.2006年;3:680–686.-公共医学
    1. 欧文斯GK。血管平滑肌细胞分化的调节。生理学。1995年修订版;75:487–517.-公共医学
    1. Rensen SSM、Doevendans PAFM、van Eys GJJM。血管平滑肌细胞表型多样性的调控及其特征。荷兰心脏杂志2007;15:100–108。-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Lagna G等。通过心肌蛋白相关转录因子通过BMP信号传递控制平滑肌细胞的表型可塑性。生物学杂志。化学。2007;282:37244–37255.-项目管理咨询公司-公共医学

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