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.2008年4月；12(2):569-79.
doi:10.1111/j.1582-4934.2007.00145.x。

低氧HepG2细胞二价金属转运体1表达与低氧诱导因子-1含量的相关性

朱莉 1, 张莱, 柯亚, 杜芳, 容永浩（Yung Wing Ho）, 杨磊, 钱忠明
附属公司

低氧HepG2细胞二价金属转运体1表达与低氧诱导因子-1含量的相关性

朱莉等。 细胞与分子医学杂志. 2008年4月.

摘要

转铁蛋白和转铁蛋白受体是铁代谢的两个关键蛋白，已被鉴定为低氧诱导基因。二价金属转运蛋白1（DMT1）也是生理条件下铁的关键转运蛋白。此外，在人类DMT1的5'调控区（-412到-570之间），有两个与缺氧诱导因子-1（HIF-1）结合位点类似的基序（CCAAAGTGGG）。因此推测DMT1可能也是一个低氧诱导基因。我们研究了缺氧和缺氧/复氧对HepG2细胞中DMT1表达和HIF-1α含量的影响。正如我们所预期的那样，HIF-1α、DMT1+IRE（铁反应元件）和DMT1-IRE蛋白的表达对化学（CoCl（2））或物理缺氧的反应有非常相似的趋势。缺氧细胞中DMT1蛋白的表达与HIF-1的含量之间存在高度显著的相关性。在细胞暴露于缺氧和随后的常氧后，不能检测到HIF-1α，并且观察到DMT1+IRE表达显著降低（P<0.05），但DMT1-IRE蛋白（与缺氧组相比）没有显著降低。研究结果表明HIF-1通路可能在低氧时调节DMT1+IRE的表达中起作用。

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经或不经CoCl处理的HepG2细胞中DMT1+IRE和DMT1−IRE蛋白的表达及HIF-1α的含量2按照材料和方法中的描述培养HepG2细胞。在烧瓶中生长到80%汇合后，用氯化钴处理细胞2（0、0.05、0.125、0.5或1 mM）持续4小时，然后进行Western blot分析以确定HIF-1α的水平(A类,B类)，DMT1+线(C类,D类)和DMT1−IRE(E类,F类)HepG2细胞中。(A类,C类和E类)HIF-1α蛋白印迹的代表性实验(A类)，DMT1+IRE(C类)和DMT1−IRE(E类); (B类,D类和F类)：HIF-1α表达的量化(B类)，DMT1+IRE(D类)和DMT1−IRE(F类)HepG2细胞中的蛋白质。β-肌动蛋白的表达值被归一化，数据以平均值±SEM表示(n个= 3).*P（P）<0.05, **P（P）<0.01与控制（0 mM CoCl2).
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经或不经物理缺氧处理的HepG2细胞中DMT1+IRE和DMT1-IRE蛋白的表达以及HIF-1α的含量。按照材料和方法中的描述培养HepG2细胞。在烧瓶中生长到80%汇合后，细胞暴露于缺氧（1%O2)在不锈钢缺氧室中持续0、1、3、6、12或24小时。然后进行Western blot分析以确定HIF-1α的水平(A类,B类)，DMT1+IRE(C类,D类)和DMT1−IRE(E类,F类)HepG2细胞中。(A类,C类和E类)HIF-1α蛋白印迹的代表性实验(A类)，DMT1+IRE(C类)和DMT1−IRE(E类);(B类,D类和F类)：HIF-1α表达的量化(B类)，DMT1+IRE(D类)和DMT1−IRE(F类)HepG2细胞中的蛋白质。β-肌动蛋白的表达值被归一化，数据以平均值±SEM表示(n个=3）*P（P）<0.05, **P（P）<0.01与对照组（0h缺氧）。
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缺氧/复氧对HepG2中DMT1蛋白表达和HIF-1α含量的影响。按照材料和方法中的描述培养HepG2细胞。在烧瓶中生长到80%汇合后，细胞暴露于缺氧（1%O2)持续6小时（H：仅缺氧）或缺氧（1%O2)持续6小时，然后暴露于氮氧化物血症（21%O2)24小时（H/R：缺氧/复氧）。然后进行HIF-1α、DMT1+IRE和DMT1−IRE的Western blot分析。(A类和C类)：HIF-1α、DMT1+IRE和DMT1−IRE的Western blot代表性实验；(B类和D类)：定量HIF-1α、DMT1+IRE和DMT1−IRE蛋白在HepG2细胞中的表达。β-肌动蛋白的表达值进行了标准化，数据表示为平均值±S.E.M(n个= 3). *P（P）<0.05与只有缺氧。
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DMT1蛋白和HIF-1α两种亚型在HepG2细胞中的分布。HepG2细胞暴露于常氧或缺氧6小时，然后用识别DMT1+IRE的一级抗体染色(A类)，DMT1−IRE(B类)或HIF-1α(C类)其次是与Alexa fluor 568结合的第二个抗体。使用Leica SP2共焦激光显微镜获得图像。N： 诺莫西娅。H： 缺氧。一：共焦图像和b条：差分扫描图像。
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缺氧HepG2细胞中DMT1蛋白表达调控的假设机制。
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