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.2008年4月;8(7):1346-61.
doi:10.1002/pmic.200700884。

用强阴离子交换色谱富集和分离磷酸肽对人肝组织进行大规模磷酸蛋白质组分析

附属公司

用强阴离子交换色谱富集和分离磷酸肽对人肝组织进行大规模磷酸蛋白质组分析

汉族广汇等。 蛋白质组学. 2008年4月.

摘要

从蛋白质组样品中富集的磷酸肽混合物非常复杂。为了降低复杂性,有必要对磷酸肽进行分级。然而,传统的富集方法通常只富集磷酸肽,而不分离磷酸肽。本文介绍了强阴离子交换色谱(SAX)在磷酸肽富集和分离中的应用。研究发现,磷酸肽被SAX高度富集,大多数未经修饰的肽不与SAX结合。与Fe(3+)固定化金属亲和色谱(Fe(3+)-IMAC)相比,当SAX仅产生一个组分时,从同一样品中鉴定出几乎双重磷酸肽。SAX和Fe(3+)-IMAC在磷酸肽的富集和鉴定中表现出互补性。研究还表明,SAX具有根据其与SAX吸附剂的不同相互作用在梯度洗脱下分离磷酸肽的能力。SAX被进一步应用于富集和分离从靠近肿瘤区域的人类肝组织提取的蛋白质的胰蛋白酶消化物中的磷酸肽,以进行磷酸蛋白质组分析。这使得我们以0.96%的错误发现率(FDR)从305个与168个蛋白质相对应的独特磷酸肽中高度自信地鉴定出274个磷酸化位点。

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