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.2007年10月5日;372(5):1227-45.
doi:10.1016/j.jmb.2007.07.017。 Epub 2007年7月21日。

与DNA结合的Wilms抑癌蛋白锌指结构域的结构

附属公司

威尔姆斯肿瘤抑制蛋白锌指结构域与DNA结合的结构

拉斐尔·斯托尔等。 分子生物学杂志. .

摘要

Wilms抑癌蛋白(WT1)的锌指结构域包含四个典型的Cys(2)His(2)锌指。WT1优先与与EGR-1共识位点密切相关的DNA序列结合。我们报道了与DNA配合物中WT1锌指结构域的X射线晶体学和核磁共振谱的结构测定。测定了具有同源14碱基对寡核苷酸的配合物的X射线结构,并测定了具有14碱基和延伸17碱基对DNA的配合物复合X射线/NMR结构。这种组合方法可以明确确定第一锌指的位置,这受晶体结构中晶格接触的影响。晶体结构显示,第二、第三和第四锌指结构域深深插入DNA的主凹槽中,在那里它们进行碱基特异性相互作用。DNA双链在第一个锌指附近发生扭曲,胞苷扭曲并从碱基堆栈中倾斜出来,紧贴着第1个锌指和第2个锌指的尖端。相比之下,复合X-射线/NMR结构显示,指状物1继续沿着溶液络合物中的主凹槽移动。然而,螺旋线的方向是非正则的,指尖和螺旋线的N端伸出主槽;因此,通常参与碱基识别的锌指侧链与DNA没有接触。我们的结论是,手指1有助于通过扩增结合亲和力将WT1锚定到DNA,尽管它对结合特异性没有显著贡献。这些结构在分子水平上揭示了锌指2和锌指3突变的潜在后果,这些突变与登革热综合征和肾病综合征相关。突变有两种类型,要么破坏锌指结构的稳定性,要么取代关键的碱基接触残基。

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