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.1991年12月;6(12):2339-48.

WT1 Wilms肿瘤基因座编码的锌指蛋白的特征

附属公司
  • PMID: 1662794

WT1 Wilms肿瘤基因座编码的锌指蛋白的特征

J F莫里斯等。 癌基因. 1991年12月.

摘要

我们分析了存在于WT1 Wilms肿瘤位点的假定肿瘤抑制基因编码的转录因子的生化特性。从合成的寡核苷酸中重建了一个包含人类wt1全长氨基酸编码序列的基因,并将其克隆到表达载体中,用于体外和体内蛋白质合成。针对WT1蛋白的多克隆兔抗体被提高到大肠杆菌产生的91个氨基酸N末端片段和136个氨基酸C末端片段,其中包含锌指结构域。体外翻译产生的WT1在十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶上迁移为52 kDa蛋白,并在凝胶阻滞试验中与EGR一致序列结合。通过瞬时转染在COS-1细胞中表达wt1基因,发现一个52 kDa蛋白,该蛋白由N端和C端特异性抗血清免疫沉淀。wt1转染COS-1细胞的免疫荧光研究表明,wt1蛋白定位于细胞核。[32P]正磷酸盐的代谢标记未能显示COS-1细胞中WT1蛋白的显著磷酸化。在小鼠胚胎干细胞和COS-1肾细胞中观察到两种52和54 kDa的免疫反应性WT多肽,可能代表先前确定的WT1剪接变体。这些抗血清有助于表征人类Wilms肿瘤标本中WT1蛋白的结构和功能。

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