跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https系统

该站点是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
比较研究
.2005年6月；6(6):538-44.
doi:10.1038/sj.embor.7400417。

动力蛋白轻链1对雌激素受体途径的功能调节

苏雷什·K·拉亚拉 1, 佩特拉·登·霍兰德, 西塔拉曼·巴拉森蒂尔, 杨志波, 罗素·R·布罗德斯, 拉凯什·库马尔
附属公司
比较研究

动力蛋白轻链1对雌激素受体途径的功能调节

苏雷什·K·拉亚拉等人。 EMBO代表. 2005年6月.

勘误表in

  • EMBO代表，2005年11月；6(11):1101

摘要

肌动蛋白轻链1（DLC1）的过度表达和磷酸化已被证明可以促进乳腺癌细胞的生长。然而，DLC1在雌激素受体（ER）作用中的作用尚不清楚。在这里，我们发现雌激素诱导DLC1的转录和表达。DLC1促进雌激素诱导的内质网转录激活和乳腺癌细胞的锚定非依赖性生长。我们证明DLC1与ER相互作用，并且这种相互作用是DLC1的事务驱动活动所必需的。此外，DLC1的表达导致DLC1-ER复合物向ER靶基因染色质的招募增强。相反，DLC1下调损害了ER转换活性及其核积累，表明DLC1在ER核转位中具有潜在的伴侣样活性，这些数据定义了雌激素对DLC1的意外上调，以及之前未被认识到的DLC1-ER相互作用在支持和放大乳腺癌细胞中ER激发的细胞反应。

PubMed免责声明

数字

图1
图1
DLC1是一个E2反应基因。(A类)雌激素刺激后DLC1 mRNA增加。用不同浓度的E2处理MCF-7细胞16 h，并用northern印迹法进行分析。(B类)放线菌素D对E2上调MCF-7细胞DLC1 mRNA能力的影响。在E2和/或放线菌素D（10μg/ml）处理后的不同时间点收集细胞，并通过northern blotting分析DLC1 mRNA。(C类)MCF-7和E2处理24小时的石川细胞DLC1启动子活性上调。细胞转染ERE-luc 24小时，E2处理24h，并测量ERE-luch活性。(D类)E2处理24小时后MCF-7和石川细胞DLC1蛋白上调。
图2
图2
DLC1雌激素调节的信号通路。(A类)MCF-7/DA-Pak1细胞中DLC1 mRNA和蛋白的表达增加。用Dox诱导细胞，并评估DLC1 mRNA和蛋白水平。(B类)MCF-7/DN-Pak1细胞中DLC1 mRNA和蛋白的表达降低。用Dox和DLC1 mRNA诱导细胞8小时，并评估蛋白水平。(C类)siRNA-Pak1处理MCF-7细胞24小时后DLC1 mRNA下调(D类)通过表达Pak1或DN-Pak1调节MCF-7细胞中DLC1启动子活性24小时。野生型WT。
图3
图3
DLC1过度表达导致E2超敏反应。(A类)Dox介导MCF-7/DLC1克隆中T7-DLC1表达上调。(B类)DLC1过表达通过E2增强Bcl-2的表达。MCF-7/DLC1细胞接受或不接受Dox处理，并用E2刺激24小时(C类)DLC1敲除降低孕酮受体（PR）和组织蛋白酶D的表达。用对照或DLC1特异性siRNA处理细胞48小时，用E2刺激细胞24小时。然后，用所示抗体对裂解产物进行免疫印迹。(D类)DLC1过度表达增强了E2介导的MCF-7和石川细胞ERE-luc活性的刺激。用ERE-luc转染MCF-7和石川细胞，用E2处理24 h，并测定ERE-luc活性。(E类)DLC1上调增强E2对生长的刺激。MCF-7/DLC1细胞接受或不接受Dox处理，并用E2刺激5天。(F类)DLC1上调促进了凤尾鱼非依赖性菌落的形成。将MCF-7/DLC1细胞置于软琼脂中，用Dox处理或不处理，并用E2刺激21天。(G公司)DLC1表达水平影响MCF-7细胞的生长。用对照或DLC1 siRNA处理细胞48小时，用E2处理细胞72小时(H（H）)DLC1介导的内质网反式激活增强依赖于MCF-7细胞中DLC1的状态。用对照组或DLC1 siRNA处理细胞48小时。用ERE-luc转染细胞，用E2处理细胞24小时，然后测量ERE-luch活性。
图4
图4
DLC1与雌激素受体相互作用在体外和体内. (A类)DLC1与ER的相互作用在体外GST下拉分析显示GST–DLC1与在体外-翻译的35标有S的ER(B类)DLC1与ER的AB结构域的相互作用。GST下拉分析显示GST–ER缺失结构与在体外-翻译的35标有S的DLC1。(C类)在DLC1中映射ER绑定区域。GST下拉分析显示GST–DLC1缺失结构与在体外-翻译的35标有S的ER(D类)DLC1和ER相互作用体内用抗ER单克隆抗体免疫沉淀细胞裂解物，并用抗DLC1或抗ER抗体印迹。(E类)DLC1过度表达增加DLC1–ER相互作用。用Dox处理或不处理MCF-7/DLC1细胞，并用E2刺激1 h。用抗ER单克隆抗体免疫沉淀细胞裂解物，并用抗T7或抗ER抗体印迹。(F类)ERE-luc分析表明，DLC1上ER结合位点的缺失阻断了转录激活。
图5
图5
DLC1和雌激素受体定位及染色质研究。(A类–C类)招募ER和DLC1加入第2页启动子染色质。MCF-7/DLC1细胞接受或不接受Dox治疗24小时，E2刺激1小时，用抗ER或抗T7抗体进行ChIP。IP，免疫沉淀。(A类)DLC1加强了ER招募。上面板：304-bp的PCR分析第2页与ER相关的启动子片段。下面板：输入DNA的PCR分析。ER或T7-DLC1在靶启动子上的相对募集表现为折叠变化。(B类)雌激素诱导DLC1向靶染色质募集。304-bp的PCR分析第2页与T7-DLC1相关的启动子片段（上面板）；输入DNA的PCR分析如下所示。(C类)DLC1招募到第2页启动子染色质取决于ER（上面板）的存在。304-bp的PCR分析第2页与T7-DLC1相关的启动子片段；输入DNA的PCR分析如下所示。(D类)石川细胞生长在盖玻片上，用对照或DLC1 siRNA处理48小时。盖玻片与DLC1和ER抗体孵育，然后分别与Alexa-546（红色）和Alexa-488（绿色）结合的二级抗体孵养。箭头表示内质网胞质染色阳性的细胞(E类)ER与DIC交互体内用抗DIC单克隆抗体免疫沉淀MCF-7细胞裂解物，并用抗DLC1、抗ER或抗DIC抗体印迹。WB、western blot。(F类)DLC1在ER中的作用–DLC1与DIC交互。用对照或DLC1 siRNA处理MCF7细胞裂解液，用抗DIC单克隆抗体免疫沉淀，并用DLC1、ER和DIC抗体印迹。右侧面板显示了siRNA敲除DLC1的程度。
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

查看所有“被引用”文章

工具书类

    1. Beckwith SM，Roghi CH，Liu B，Ronald Morris N（1998）“8-kD”细胞质动力蛋白轻链是核迁移和巢状曲霉中动力蛋白重链定位所必需的。细胞生物学杂志143:1239–1247-项目管理委员会-公共医学
    1. Benashski SE，Harrison A，Patel-King RS，King SM（1997）动力蛋白和肌球蛋白共享的高度保守轻链的二聚体。生物化学杂志272:20929-20935-公共医学
    1. Bokoch GM（2003）p21-活化激酶生物学。生物化学年鉴2:743–781-公共医学
    1. Dick T，Ray K，Salz HK，Chia W（1996）细胞质动力蛋白（ddlc1）突变导致果蝇的形态发生缺陷和凋亡细胞死亡。分子细胞生物学16:1966–1977-项目管理委员会-公共医学
    1. Herynk MH，Fuqua SA（2004），人类疾病中的雌激素受体突变。Endocr第25版：869–898-公共医学

出版物类型