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.1992年5月15日;267(14):9868-73.

人类雌激素受体激素结合域中温度敏感性突变的特征。细胞提取物和完整细胞的研究及其对激素依赖性转录激活的影响

附属公司
  • PMID: 1577818
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人类雌激素受体激素结合域中温度敏感性突变的特征。细胞提取物和完整细胞的研究及其对激素依赖性转录激活的影响

J C里斯等。 生物化学杂志. .
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摘要

该实验室的先前报告(Reese,J.C.和Katzenellenbogen,B.S.(1991)J.Biol。化学。26610880-10887)鉴定出一个雌激素受体(ER)突变体,该突变体与野生型ER具有相似的雌二醇结合亲和力,但在反式激活研究中显示出雌二醇的剂量反应改变。在本研究中,我们利用激素结合、DNA结合和基因转移实验进一步表征了该突变体,该突变体在受体的激素结合域的氨基酸447处含有丙氨酸取代半胱氨酸。激素结合研究表明,C447A受体是一种温度敏感性突变体,其不稳定性仅在高温下才明显,并且配体可以稳定突变体受体。Western blot分析表明,激素结合的温度敏感性丧失并不是由于受体蛋白的降解,而是受体激素结合能力的失活。除了C447A突变体的激素结合能力损失外,该突变体还表现出受体的DNA结合能力的温度敏感性损失。突变型和野生型受体的反激活谱表明,在更高的环境温度下,随着雌二醇浓度的增加,转染细胞的培养使突变受体的剂量-反应曲线向左移动,并在野生型曲线上收敛。因此,这些反式激活研究表明,在细胞中观察到的这种突变的剂量-反应变化反映了C447A突变的激素结合和DNA相互作用的测量不稳定性,这可以在体外证明。此外,这种对温度敏感的内质网突变体的有趣之处在于,它的DNA结合现在依赖于配体,其结果是转录激活现在平行于配体对受体的占据,这与其他类固醇激素受体类似。

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