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.2004年6月18日;279(25):26143-8.
doi:10.1074/jbc。M402362200。 Epub 2004年4月8日。

MEK/ERK信号通路的抑制通过蛋白磷酸酶4介导的NF-kappaB p65 Thr去磷酸化增强顺铂诱导的NF-kappaB活化

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MEK/ERK信号通路的抑制通过蛋白磷酸酶4介导的NF-kappaB p65 Thr去磷酸化增强顺铂诱导的NF-kappaB活化

裴延业(Pei Yen Yeh)等。 生物化学杂志. .
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摘要

我们以前曾报道过抑制MEK/ERK通路会增加SiHa细胞的耐药性。在本研究中,我们进一步描述了这种现象的潜在机制。用MEK/ERK抑制剂预处理SiHa细胞可增强顺铂诱导的NF-kappaB活化。然而,免疫印迹分析结果表明,顺铂和MEK/ERK抑制剂均未诱导显著的IkappaBalpha降解,这表明抑制MEK/ERK信号通路可能通过传统途径以外的机制增强顺铂诱导的NF-kappaB活化。先前的研究发现,蛋白磷酸酶4(PP4),一种核丝氨酸/苏氨酸磷酸酶,直接与NF-κB相互作用并激活NF-κB,这使我们研究了NF-κB p65的磷酸化状态。与NF-kappaB的激活一致,顺铂诱导Ser磷酸化,但降低NF-kapbaB p65的Thr磷酸化。MEK/ERK通路的抑制进一步增强了顺铂诱导的Thr去磷酸化,但不影响顺铂诱导NF-kappaB p65的Ser磷酸化。此外,与Thr去磷酸化平行,顺铂处理的细胞中核PP4的蛋白水平增加,并通过抑制MEK/ERK途径进一步增加。然后用正或反义PP4基因转染SiHa细胞。PP4-过表达细胞显示NF-kappaB p65的Thr磷酸化降低到几乎无法检测到的水平,并且基础和顺铂诱导的NF-kapbaB活性均高于亲代细胞。相比之下,顺铂单独或与MEK/ERK抑制剂联合使用,在反义PP4转染细胞中几乎没有诱导NF-kappaB活化。共沉淀复合激酶分析显示NF-kappaB p65片段(氨基酸279-444)包含直接与PP4相互作用的潜在磷酸化位点。进一步的定点突变研究表明,Thr(435)是主要的磷酸化位点。

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