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.2002年6月11日;99(12):8167-72.
doi:10.1073/pnas.102674699。 Epub 2002年6月4日。

NF-kappa B DNA-蛋白相互作用的定量预测

附属公司

NF-kappa B DNA-蛋白相互作用的定量预测

伊琳娜·阿乌达洛娃等。 美国国家科学院程序. .

摘要

我们描述了一种基于主坐标分析的通用方法,用于预测调控序列中单核苷酸多态性对DNA-蛋白质相互作用的影响。我们使用转录因子NF-kappaB的结合数据作为测试系统。该方法结合了结合位点中碱基对位置之间相互作用的影响,我们证明了NF-κB存在这种相互作用。预测精度高于剖面模型,通过交叉验证和我们对额外序列预测的实验验证证实了这一点。计算人类22号染色体上所有潜在NF-kappaB位点的结合亲和力,以及已知单核苷酸多态性的影响,以确定可能的功能变体。我们认为,当标准轮廓模型因复杂的核苷酸间相互作用而处于不利地位时,这种方法本身或与其他方法结合可能是有价值的。

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图1
图1
与广义NF-κB共识GGGRNNYYCC匹配的位点具有广泛的亲和力。(A类)重组纯化p50和p50右驾车型/第65页右驾车型这些蛋白被用于EMSA中,带有对应于NF-κB共识序列不同变体的放射性标记探针。(B类)50个NF-κB样序列的p50p50和p50p65结合数据。序列按照x个通过其与p50p50的结合亲和力来确定轴。每个点代表两个独立测量的几何平均值。这些数据来自八种凝胶,由PhosphorImager定量,并根据控制序列GGGTTCCCC标准化,其值为227。有关标记序列的解释,请参阅文本。
图2
图2
交叉验证预测的结合亲和力(轴)根据观测值绘制(x个轴)。误差条给出了95%的置信区间。
图3
图3
四个主要主坐标的序列特征。PC1、PC2和PC4对p50p50和p50p65复合物均显著,PC3仅对p50p65显著(如括号中所示)。对于每个具有统计意义的主坐标,序列沿着坐标排序。计算了平均基频上部下部NF-κB位点6-bp核心内每个位置25%的位点,例如,对于主坐标1,12/13个上四分位序列在位置3处有一个g,一个有一个a,而10/13个下四分位顺序有一个B,3个有g上部下部绘制四分位数(PC1,位置3:9表示G,−9表示A)。因此,PC1代表GGG**CCCC(高亲和力)和GGAA**TTCC(低亲和力)之间的对比。
图4
图4
核苷酸变异对侧翼G的影响1,G2,C9、和C10在p50p50和p50p65的结合亲和力上的位置。重组纯化p50和p50右驾车型/第65页右驾车型在EMSA中使用与五个随机NF-κB共有序列(1、3、5、7、9道)相对应的放射性标记探针及其在22号染色体上发现的多态性变体(2、4、6、8、10道)。

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